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2.组织来源:视网膜组织
3.产品规格:5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:
视网膜微血管内皮细胞分离自视网膜组织;视网膜居于眼球壁的内层,是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成,两层间在病理情况下可分开,称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连,由色素上皮细胞组成,它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层,由外向内分别为:色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜,有感光作用;后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。第一神经元是视细胞层,专司感光,它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上,而视锥细胞则在中心凹处最多。第二层叫双节细胞,约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系,负责联络作用。第三层叫节细胞层,专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构,它贴于眼球的后壁部,传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面,经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的,在黄斑区,其分辨能力最强。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞,它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用,在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性,在脑和视网膜中,这些内皮细胞具有内屏障的功能,在调节血管生理状态,释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用,体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。
本公司生产的视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息:
M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
同时,YBio还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
二.使用方法
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜,以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落,再加入完全培养液终止消化,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min;
3)用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中,滴加入完全培养液5ml混匀细胞,然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中;
3)放置于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
三.注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月;
2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作;
3、原代培养的细胞,不建议多次传代后进行实验。如果您的实验时间较长, 请在收到细胞后传代时,按细胞量分种2瓶,使用其中的一瓶细胞实验,其余的细胞先冻存起来。下次实验需要时,再复苏;
4、该细胞只可用于科研;
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