大鼠、小鼠心脏干细胞（祖细胞）分离培养方法

大鼠、小鼠心脏干细胞（祖细胞）分离培养方法

 心脏病是引起人类死因的一种代表性疾病，如果失去了心肌细胞，就会引起心力衰竭等心脏疾病。心肌细胞几乎没有再生能力，一旦失去就不能再生。从前认为心脏当中没有干细胞，所以心肌没有再生能力，但是近年的研究表明，成体心脏内部也会存在一些心肌干细胞。赛百慷公司开发出一种新型心肌干细胞培养方法，希望能为这项研究的科学工作者提供帮助。

       细胞培养操作：
       1.摘取出心脏，去掉心脏包膜，把心尖部分剪下来（心尖部分是心室部分，心肌细胞含量高）。
       2.剪碎，移入15或50ml离心管中，用PBS多洗几遍，尽量把血细胞洗掉。
       3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培养基，37℃、一小时浸泡。
       4.采用贴块法：用枪把组织块连同培养基一同移入T25瓶中，然后用枪吸出培养基。在培养箱中放置1-2小时，待组织粘贴在瓶底后，加入3ml含20%血清的IMDM培养基。
       5.在贴块培养到第三、四天时，从组织块上会脱落一些细胞团和单个细胞，收集到15ml离心管中。
       6.采用300rpm离心（或自然沉淀），去上清，取沉淀部分的细胞培养（多为细胞团）。
       7.用IMDM/DMEM/F12完全培养基培养：10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
       8.细胞团中的细胞在第二天就会出现圆形扩散生长（呈集落生长，像太阳发光的模样），细胞形态不像成纤维细胞那样呈梭形状，而是有些偏圆。 

       9.心脏干细胞生长速度很快，两三天就能长满。