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pTrcHis C
别名: | pTrcHisC |
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质粒类型: | 大肠杆菌表达载体 |
表达水平: | 高拷贝 |
启动子: | Trc |
克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
载体大小: | 4412 bp (查看载体序列) |
5' 测序引物及序列: | pTrcHis-F: gaggtatatattaatgtatcg |
3' 测序引物及序列: | pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG |
载体标签: | N-His, N-Xpress |
载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
pTrcHis载体是来由pBR322质粒衍生而来的表达载体,设计用来在大肠杆菌中进行重组蛋白的高效表达和纯化。
载体上的Trc启动子和rrnB抗终止区使得高水平蛋白表达成为可能.Trc启动子由Trp启动子的-35区域和Lac启动子的-10区域共同组成。pTrcHis载体同时包含有一个LacIq基因,该基因编码了Lac启动子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+还是LacIq-都可以高效抑制插入基因的转录。
进行蛋白表达时,大肠杆菌需要生长到对数生长期,然后加入1mM IPTG,去除阻遏蛋白,诱导表达。载体上的迷你顺反子结构能够增强插入基因的转录水平,从而高水平表达目的蛋白。DNA插入片段位于载体表达片段下游,在其上游有一个N-端融合表达多肽序列,该序列包含有ATG起始密码子,6xHis标签,T7噬菌体10号基因的翻译增强子,X press抗原表位,肠激酶酶切识别位点。
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