F-DH5α F-DH5α快速转化感受态细胞产品说明书

产品规格:

F-DH5α 10×100μl

pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl

基 因 型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1

gyrA96 relA1 phoA

DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。

缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证

了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝、白斑筛选 F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、涂板操作. pUC19 质粒检测转化效率可达 1~5×10 8cfu/μg DNA。

简 要 说 明

快速转化操作方法 (10min)

（一）提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。（二）F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）

并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。（三）用 200 μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 LB 培养基上，涂均匀，表面无水渍。

（四）将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。

一、F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)

并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。 二、42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，

37℃，200 rpm 复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。 三、将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。

（一）F-DH5α快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步

骤操作：F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中

静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂

板。（二）感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存

放会降低转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。 （三）F-DH5α快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，

转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激

转化操作，增加孵育步骤。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃