大肠杆菌DH5α化学感受态细胞

产品及特点 本产品是采用大肠杆菌 DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15 基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α 互补，可用于蓝白斑筛选。recA1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，适用于高效的质粒 DNA 克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。本菌种来源于 Hoffman-Berling 1100 菌种，具有下列特点：

基因型 表现型

deo R 组成型合成脱氧核糖

end A1 核酸内切酶 I 缺失

gyr A96 具有萘啶酮酸抗性

hsd R17 限制性酶 EcoK 缺失

△(lac )U169 lac 基因缺失

rec A1 DNA 重组活性降低

relA1

允许在无蛋白质合成时有 RNA 合成

sup E44

抑制琥珀突变突变，为某些噬菌体必需

thi -1 不能自身合成硫氨

φ80（lac ZΔM15） 提供α-互补所需的ω片断

规格及成分 成分 十孔盒包装

大肠杆菌DH5α化学感受态细胞 0.1mL×10

使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

使用方法 1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。