大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞

产品及特点 Rosetta-gami (DE3) pLysS 是 Rosetta-gami (DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌，包括 Tunerlac 透性酶突变以及 gor B/gor 突变帮助细胞质内二硫键形成。其基因型如下：∆( ara–leu)7697 ∆ lac X74 ∆ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F'[lac+lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10 (TcR)gorB::kan plysS pRARE (CmR)

规格及成分 成分 编号 包装

本产品 130560 0.1 mL×10

使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法 1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。