大肠杆菌Tuner(DE3)化学感受态细胞

产品及特点本产品是大肠杆菌 Tuner(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Tuner 系列菌株是 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够同时调整同一培养体系中所有细胞的蛋 白表达水平。lac 通透酶（lacY）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而获得浓 度依赖的、水平均一的诱导。通过改变 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强的、 完全诱导的表达水平（通常与所使用的 pET 载体相关）。低水平表达可以增强难表达蛋 白的溶解性和活性。（DE3）宿主菌是 lDE3 溶原菌，染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。本感受态细胞一般配合 pET 载体一起表达。

Tuner(DE3)菌株基因型：
规格及成分成分 编号 10 支包装
本产品 LM130562-10 0.1mL×10
使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根 据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适 量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用 移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体 被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平 板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数 较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布 于平板中。

2 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。