蛋白胶中量回收试剂盒

产品及特点 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法，它具有下列特点：

1. 简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）。

2. 适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶。

3. 每次可以处理 1 g 的 PAGE 胶（具体多少蛋白质取决于上样的浓度）。

4. 回收率一般在 50-90%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。

5. 跟后续的实验兼容，包括 2-D 电泳、质谱测序等。

规格及成分 成 份 编 号 大扁盒包装

蛋白胶中量纯化溶液 A 90403a 5 mL

蛋白胶中量纯化溶液 B 90403b 50 mL

20mL 塑料注射器 90403c 5 只

使用手册 90403sc 1 份

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂 无

使用方法 1. 按常规方法进行变性（SDS-PAGE）或非变性蛋白电泳。

2. 切取含目的蛋白条带的 PAGE 胶（尽可能地把多余的胶切除，否则会影响回收效率）。注意：PAGE 胶固定和染色后蛋白回收效果很差，所以建议把样品分多孔上样，电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色，然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置，通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域，并切下此区域的胶进行回收。

3. 将切下的、重量不超过 1 克的胶块转移到 20 mL 塑料注射器中。用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去，使之变成细小的碎片，用自备的15mL 塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。（用其他方法捣碎 PAGE 胶条也可以，包括液氮研磨）。

4. 加入 1 mL 蛋白胶中量纯化溶液 A，4℃摇晃洗脱至少 2-16 小时（过夜）。此时最好将将要使用的蛋白胶中量纯化溶液 B 放在冰箱预冷。

5. 10,000 g 离心 10 分钟，转移上清到新的 10-15mL 的塑料离心管中，注意不要吸取碎胶。

6. 加入 5 倍体积的预冷的蛋白胶中量纯化溶液 B，摇晃混匀。

7. -20℃放置至少 10-30 分钟。

8. 室温 12,000 g（注意：一定要检查使用的离心管是否能够耐受此离心力，如果不能建议将溶液分到 1.5 mL 的塑料离心管中再进行离心处理）离心

5-20 分钟，弃上清。

9. 室温充分晾干，得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中，可用于后续实验（2-D 电泳、质谱测序等）。