Deoxyribonuclease I (DNase I) from bovine pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺

产品信息

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca²⁺，并可被二价金属离子如Co ²⁺，Mn²⁺，Zn²⁺等激活。5 mM Ca²⁺可保护酶使其不被水解。在Mg²⁺存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn²⁺存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。

本品来自牛胰腺，由四种色谱区分的组分A，B，C，D构成，摩尔比为4:1:1，而D组分非常少。分子生物学实验中常用于清除蛋白或RNA样品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，酶活力≥2000 Kunit Units/mg蛋白。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，0.1 mM PMSF，50%甘油。

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法（仅供参考，具体实验可做适当调整）

1、应用于蛋白提取实验

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl₂。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

2、应用于RNA提取实验

10×反应缓冲液：200 mM Tris-HCl（pH 8.4），20 mM MgCl₂，500 mM KCl。

1）反应体系：1 μg RNA样本，1 μL 10×反应缓冲液，1 μL DNase I（1 U/μL），DEPC水补足至10 μL。

【注】体系中最好加入适量RNase Inhibitor（Cat NO.10603ES），以防止RNA降解。

2）反应条件：37℃，10-15 min。

【注】消化时间不要超过15 min或温度不要超过37℃，否则残留的RNase A污染可能会降解RNA。

3）终止反应：加入1 μL 25 mM EDTA，65℃加热处理 10 min。

【注】在不同的反应缓冲体系内，用于完全消化一定量DNA所需的DNase Ⅰ量不一样，请根据具体实验的工作体系确定。