Phleomycin (20 mg/mL in solution) 腐草霉素

产品信息

产品描述

Phleomycin，中文名腐草霉素，由Streptomyces verticillus（轮枝链霉菌）的突变株产生的一种糖肽抗生素，属于博来霉素(bleomycin)家族。抑菌机制在于腐草霉素可结合并插入DNA，从而破坏其双螺旋结构的完整性。腐草霉素对大多数细菌、真菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞都有活性，尤其适用于对Zeocin敏感性低的细胞，如酵母菌和丝状真菌。

腐草霉素是分子遗传学研究中的选择性抗生素之一，可用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞。Sh ble基因来源于Streptoalloteichus hindustanus，其可编码一种14 kDa的蛋白，该蛋白可与腐草霉素强烈结合从而抑制其切割DNA链的活性。腐草霉素是由多种结构类似物构成的复合物，这些复合物仅仅在末端胺基有所差异。另外，因属于铜离子螯合的复合物，溶液呈蓝色。

本品以20 mg/mL的无菌溶液形式提供，可直接用于细胞培养，在0.1-50 μg/mL浓度范围内，腐草霉素可以抑制大多数好氧细胞的生长。

产品性质

运输与保存方法

冰袋运输。4℃或-20℃保存。4℃有效期12个月，-20℃有效期18个月。避免反复冻融。

注意事项

1. 腐草霉素对浓酸较为敏感，但可短时间暴露于稀酸中。使用前将本品回温至室温，并轻轻混匀。

2. 腐草霉素有毒，避免直接接触皮肤，不可吞服。酸性或碱性pH，或次磷酸钠中会即刻失效。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法


【注意事项】：

1）细胞对腐草霉素的敏感性受pH值影响，如pH值越高，敏感性越高；另外，对于高渗透压培养基如原生质体再生用的培养基，腐草霉素的活性会明显降低2-3倍。因此也可能通过使用低盐培养基来降低腐草霉素使用量。

2）使用前，需将低温存放的腐草霉素置于室温回温，之后低速充分混匀。

1. 大肠杆菌

携带bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的质粒，一旦转化进入大肠杆菌受体菌如HB101，DH5a，MC1061，赋予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的转化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低盐LB琼脂培养基（Yeast extract 5 g/L，Tryptone 10 g/L，NaCl 5 g/L，Agar 15 g/L，pH 7.5）中进行筛选。加有腐草霉素的平板可于4℃稳定保存1个月。

2. 酵母菌

酿酒酵母的腐草霉素抗性转化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培养基中进行筛选。

操作步骤：按常规方法进行酵母细胞转化，一旦DNA进入细胞后，用YEPD培养基稀释细胞并置于摇床上培养6 h或过夜，使其抗性性状得以表达。之后将细胞冰浴1 h并涂布培养在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固体培养基上。

3. 真菌

根据转化子对Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培养基内进行筛选。先将细胞在4℃孵育过夜然后置于生长温度培养，可提高其对抗生素的敏感性。

4. 植物细胞

根据植物类型不同，选择5-25 μg/mL Phleomycin进行转化子筛选。

5. 哺乳动物细胞

5-50 μg/mL Phleomycin，推荐先通过建立灭杀曲线来确定最佳浓度。与G418做比较，可能需要更长的时间来杀死细胞或者使细胞从平板上脱落，尤其当细胞处于高密度的情况。

依细胞系不同，通常需要5~21天来挑选具腐草霉素抗性的稳定转染细胞。