1.产品名称：兔椎间盘纤维环细胞
2.组织来源：椎间盘组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
兔椎间盘纤维环细胞分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。
本公司生产的兔椎间盘纤维环细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Ⅰ型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM-F12、FBS、软骨细胞生长添加剂、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

同时，YBio还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 

二．使用方法 

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作： 

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。 

2、细胞传代： 

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 

2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min； 

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存： 

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 

2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入完全培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min； 

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中； 

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。 

    

4、细胞复苏： 

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 

2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入完全培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中； 

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。 

  

三．注意事项 

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月； 

2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作； 

3、原代培养的细胞，不建议多次传代后进行实验。如果您的实验时间较长， 请在收到细胞后传代时，按细胞量分种2瓶，使用其中的一瓶细胞实验，其余的细胞先冻存起来。下次实验需要时，再复苏； 

4、该细胞只可用于科研；