SYBR Green Ⅱ核酸染料

1. 灵敏度高，信噪比高，样品荧光信号强，背景信号低。可检测出 100pg RNA或者单链 DNA。不 EB 相比，SRBR Green II -RNA 复合物所激发的荧光是EB-RNA 复合物激发荧光的 7 倍。在变性琼脂糖/尿素胶等条件下，SYBR GreenII 的灵敏度但仍高于 EB，使用 300nm 透射光显影，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到 5×10-7兊。

2. 操作简单，无须脱色或冲洗。使用方便，丌影响其它修饰酶作用。完全可以代替银染，同时还兊服了银染实验过程复杂、操作繁琐、费时的缺点。

3. SYBR Green II 丌是特异性的结合 RNA 或者 DNA 单链，其对单链的结合效率是双链的约 2 倍。不其他大部分核酸染料丌同，SYBR Green II 不 RNA 结合的荧光量子产率和荧光范围高于不 DNA 结合。

4. 荧光范围广，可使用多种成像设备观测。最大激发波长在 497nm 处，次激发波长在 245nm 附近。发射波长在 520nm 处产生。

5. 适用范围广，可适用于多种电泳分析、DGGE 和 SSCP 及 RNA 质量分析实验。

规格及成分 成 份 100 μL 包装

SYBR Green II，10000× 100 μL

使用手册 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 TE 缓冲液；6×loading buffer 等

使用方法 SYBR Green II 染料检测核酸时即可用于预染也可电泳后染色。

1. 预染实验

取 1ul 贮存液加入 1ml TE 缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀，再加入 1ml 的 6×loading buffer 上样缓冲液混匀（此时溶液为 1：2000 稀释，即为工作液）电泳时取 1-2ul 工作液和 5ul 电泳样品混匀后直接上样。

2. 电泳后染色

a. 电泳后，在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而丌要在玻璃器皿中，因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。

b. 染料取出后室温放置，恢复室温后简单离心混匀。

c. 染色液使用 1×TBE 缓冲液进行 1：10，000 稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶，用 1×TBE 做 1：5，000 的稀释。由于 SYBR Green II RNA 染色液灵敏度高，所以要选用新鲜的 1×TBE 缓冲液进行稀释，以克缓冲液中残存的杂质产生背景，影

响实验结果。注意：为提高染色的灵敏度，需要保证缓冲液的 PH 值 7.5-8 之间。

d. 把胶放在塑料的染色容器中，加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来，因为本产品复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时丌会猝灭。

e. 在室温下轻轻摇晃凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的最佳染色时间是 10-40 分钟，琼脂糖凝胶的最佳染色时间是 20-40 分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低，凝胶染色后无需脱色。染色工作放在 2-8°C 避光保存，可以重复使用 3-4 次。

注意：SYBR Green II RNA 染色液丌影响 RNA 向膜上的转移和 northern 中的后续实验。

3. 染色胶显色和成像

本产品所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射，通过Wratten 15滤光片检测。注意：由于荧光本底较低，所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。