柱式DNA胶回收试剂盒（又名柱式DNAback）

产品及特点 本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，可以从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，回收效率可达50-90%（跟片段大小相关）。本产品的特点如下:

1. 高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关），可以跟跟国外著名厂家的产品媲美。

2. 快速，整个过程只需要十余分钟。洗脱液不需要额外加乙醇。

3. 两用，既可用于胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。

4. 范围广，回收DNA的长度范围为50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。

5. 能回收单链、双链及环状DNA，最大吸附量为10ug。

6. 回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。

7. 本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），可以纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250uL）。 规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装通用溶胶液 60409 25 mL

吸附柱活化液 170602 25 mL

通用洗柱液 60408 50 mL

离心吸附柱(窄口) 60911 50 套

DNA 洗脱液 3.0 170603 10 mL

使用手册 60202sc 1 份

运输及保存 常温运输及保存，有效期为一年。由于通用溶胶液 2.0 是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要 60℃加热溶解后才可以使用。 自备试剂 异丙醇

使用方法 一：对胶回收：

1. 用干净的刀片切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶（100 mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的 1.5 mL 塑料离心管（自备）中称重，按重量比为 1：2 的比例加入通用溶胶液 2.0 (0.1 g 的琼脂糖凝胶需要加入0.2mL 的通用溶胶液 2.0)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于 2%，则需要按 1：3 的比例加入通用溶胶液 2.0 溶解胶块。

2. 50℃保温 10 分钟使胶完全溶化，每隔 2-3 分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在 300bp 以下，建议不要 50℃保温，而是延长溶胶时间，以免 DNA 变性，影响回收率。

3. 在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置 2 分钟，然后 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

4. 在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积 1/2 的异丙醇（对 100mg胶块，加 50uL），快速振荡 10 秒混匀。

5. 将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置 3 分钟。注意：静置有助于 DNA 与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的最大上样体积为 0.8mL，若溶胶液的总体积大于 0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。

6. 12000-15000 g 离心 1 分钟，倒掉收集管中的穿透液。

7. 加入 0.7mL 通用洗柱液于离心柱中，12000-15000 g 离心 1 分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的 DNA 用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序）,建议加入通用洗柱液后静置 2-5 分钟再离心。

8. 12000-15000 g 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。

9. 将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管（自备）中，悬空加入 50 uLDNA 洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。注意：如果回收的 DNA 用于测序，则可用重蒸水（自备）洗脱 DNA。DNA 洗脱液可以也用 TE 替代，但用水或 TE 替代 DNA 洗脱液 3.0 时，回收率可能稍有降低。

10. 静置 3 分钟后 12000-15000 g 离心 1 分钟。

11. 离心管底部所得溶液即为纯化的 DNA 溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得 DNA 溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的 DNA。

12. 用电泳方法或测 OD 方法确定回收所得 DNA 的浓度，1 OD260 对应的浓度是 50ug/mL（对双链 DNA）或 40ug/mL（对单链 DNA），纯净 DNA的 OD260/OD280 比值应该在 1.8 左右。注意：OD 读数跟 pH 相关，如果用自备的重蒸水洗脱，OD 值会低于在 DNA 洗脱液 3.0 中测定的数字。

二：PCR 或其他酶反应回收

13. 直接在 PCR 或其他酶反应管中加 2 倍体积的通用溶胶液，振荡 10 秒混匀。如果 PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。

14. 活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置 2 分钟，然后 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

15. 在上柱前，在反应液和溶胶液的混合液中加入相当于反应体积 1/2 的异丙醇（对 100uL 的反应液，加 50uL），快速振荡 10 秒混匀。

16. 直接进入上面胶回收操作的第 5 步并进行后面的操作。 注意事项 1. 电泳回收 DNA 时，电泳缓冲液可以用 TAE、TBE 或者本公司的超快电泳液。回收效果为 SuperBuffer-2 最好，TAE 次之，TBE 最差。

2. 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。

3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用 100 mg 琼脂糖凝胶为宜。

4. 如果在 5-10 分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则 DNA 包裹在琼脂糖凝胶中，影响 DNA 的回收效率。

5. 胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使 DNA 与膜充分结合，提高回收效率。

6. 洗脱 DNA 前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续 DNA 反应。

7. 增大 DNA 洗脱液使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA 洗脱液可以用 TE 或水替代，但回收率稍有降低。 疑难解答 Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收 TBE 胶中的 DNA 效果不好？

A：因为 TBE 中的硼酸会跟硅胶表面的 OH 基团反应，而这些 OH 又是吸附DNA 所必需的。