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BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）

Product Introduction

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）	YB027D	500T	288.00
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）	YB027D	2500T	818.00
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）	YB027D	5000T	1518.00

产品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu²⁺还原成Cu⁺，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。

该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μL）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μL）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。

产品特点

1）灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/mL。

2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。

3）线性范围广，20-2000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。

4）不受大部分样品中的化学物质的影响，详情见附表1。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格			储存
编号	组分	YB027D（500T）	YB027D（2500T）	YB027D（5000T）	储存
20201-A	BCA试剂A	100mL	500mL	2×500mL	4℃
20201-B	BCA试剂B	3mL	15mL	2×15mL	4℃
20201-C	蛋白标准品（BSA）	5×1mL（2mg/mL）	10×1mL（2mg/mL）	10×2mL（2mg/mL）	4℃

运输与保存方法

冰袋运输。试剂盒中的A、B液室温或4℃保存；蛋白标准品（BSA）长时间不用，可置于-20℃保存，有效期12个月。

注意事项

1）使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。

2）低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

3）实验操作规范，提高上样量的精确度。

4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法

一、配制标准品和工作液

1. 配制BSA标准品体系

标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。BSA标准品体系配制可参考表1和表2。

表1 BSA标准品体系配制（比色皿检测，线性范围20-2000μg/mL）*

Vial	稀释液体积（μL）	2mg/mL BSA体积（μL）	BSA终浓度（μg/mL）
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	125	75	750
E	150	50	500
F	350	50	250
G	375	25	125
H	395	5	25
I	400	0	0=Blank

*如用比色皿检测，每管需加100μL标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μL。

表2 BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/mL）*

Vial	稀释液体积（μL）	2mg/mL BSA体积（μL）	BSA终浓度（μg/mL）
A	0	30	2000
B	9	21	1400
C	12	18	1200
D	15	15	1000
E	21	9	600
F	24	6	400
G	27	3	200
H	49	1	40
I	30	0	0=Blank

2. 配制BCA工作液

1）计算所需要的总BCA工作液体积。

总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液

【注】：比色皿检测时每个样品加2.0mL BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μL BCA工作液。

2）配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。

【注】：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。

二、检测方法

1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）

1）各取100μL标准品和待测样品加入到反应管中。

2）每管加入2.0mL BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。

【注】：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。

3）冷却到室温。分光光度计检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。在10分钟内对所有样品读数。

【注】：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。

4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-最终的OD_562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）

1）各取25μL标准品和待测样品加入到微孔板中。

【注】：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μL标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/mL。

2）每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。

3）冷却到室温，在酶标仪上的540-595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。

【注】：a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD_562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。

附表：BCA蛋白浓度测定的兼容性

名称	耐受浓度
Sodium bicarbonate	100mM
Sodium phosphate	25mM
2-Mercaptoethanol	0.01%
Glycercol （pure）	10%
Glycine-HCl, pH2.8	100mM
HEPES	100mM
Hydrochloric acid	100mM
Leupeptin	10mg/L
Nickel chloride （in TBS, pH8.0）	10mM
Nonidet P-40 （NP-40）	5%（w/v）
Octyl β -glucoside	5%（w/v）
Potassium thiocyanate	3.0M
SDS	5%
Sodium acetate, pH4.8	200mM
Sodium azide	0.20%
Sodium hydroxide	100mM
Sucrose	40%
Triton X-100	5%
Triton X-114, X-305,X-405	1%
Tween-20, Tween-60, Tween-80	5%
Zwittergent	1%
ACES, pH7.8	25mM
Acetone	10%
Acetonitrile	10%
Ammonium sulfate	1.5mM
Aprotinin	10mg/L
Bicine, pH8.4	20Mm
Bis-Tris, pH6.5	33mM
Borate, pH8.5	50mM
Brij-35	5%
Brij-52	1%
Brij-56, Brij-58	1%
BugBuster protein Extraction Reagent （Cat. No. 70584）	nointerference（undiluted）
Calcium chloride （in TBS, pH8.0）	10mM
CelLytic B Reagent	nointerference（undiluted）
Cesium bicarbonate	100mM
CHAPS	5%
Cobalt chloride （in TBS, pH8.0）	0.8mM
CytoBuster Protein Extraction Reagent （Cat. No. 71009）	nointerference（undiluted）
Deoxycholic acid	5%
Dithioerythritol （DTE）	1mM
Dithiothreitol （DTT）	1mM
DMF	10%
DMSO	10%
EDTA	10mM
EPPS, pH8.0	100mM
Ethanol	10%
Ferric chloride （in TBS, pH8.0）	10mM
Glucose	10mM
Glycerol	10%
Guanidine-HCl	4M
Imidazole, pH7.0	50mM
MES, PH6.1	100mM
Methanol	10%
MOPS, pH7.2	100mM
N-Acetyglucosamine（10mM）in PBS, pH7.2	10mM
Octyl β-thioglucpyranoside	5%
PIPES, pH6.8	100mM
PMSF	1mM
PopCulture Reagent （Cat. No. 71092）	nointerference（undiluted）
Reportasol Extraction Buffer （Cat. No. 70909）	nointerference（undiluted）
Sodium chloride	1M
Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4	200mM
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2	1mM
Span 20	1%
TBS （150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0）	nointerference（undiluted）
Thimerosal	0.01%
TLCK	0.1mg/L
TPCK	0.1mg/L
Tricine, pH8.0	25mM
Triethanolamine, pH7.8	25mM
Tris	250mM
Tris（hydroxypropyl）phosphine （THP）	1mM
Urea	3M
Zinc chloride （in TBS, pH8.0）	10mM