Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody 兔免疫组化（IHC）检测试剂盒

产品信息

产品描述

钰博IHC Kit for Rabbit Primary Antibody可用于检测以兔单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验，检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合：已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素（即抗原所在位置），最后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。
本品可适用于多种类型样本，如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。勿冰冻！

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）DAB是一潜在致癌物，使用时请注意自我防护。

3）检测样本时需同时做阴性对照和阳性对照。

准备试剂

1）二甲苯、乙醇、甲醇

2）去离子水

3）30%过氧化氢溶液（Cat# 36216）

4）1×PBS, PH7.4（Cat#60145）

5）苏木素染色液（Cat#60502）

6）封片剂（Cat#36313）

使用方法

1 样品准备

染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10min。石蜡切片于室温下用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复。

注：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥。

2 染色（以石蜡切片为例）

1）将处理好的石蜡切片放入3% H2O2-甲醇溶液中浸泡10min，以消除内源性过氧化氢酶的作用。

2）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

3）封闭：加一滴封闭液于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10min。

4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。

5）一抗孵育：每张切片加2滴（100μl）或适量一抗（需完全覆盖待检组织），湿盒内孵育30-60min。

6）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

7）二抗孵育：每张切片加一滴生物素标记抗兔二抗（需完全覆盖待检组织），孵育10min。

8）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

9）酶孵育：每张切片加一滴HRP标记链霉亲和素（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。

10）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

11）制备DAB显色液。

按照【20×DAB浓缩液：20×H2O2浓缩液：20×DAB底物缓冲液：水=1:1:1:20】的比例进行配制显色液，以1张切片为例，分别吸取上述3种溶液各2.5µl溶于50µl去离子水中，充分混匀即可。

注：
① DAB显色液需现配现用，避光放置，且在30min内使用。
② 可根据需要一次染多张切片，各种试剂量按照上述比例放大即可。

12）显色：向切片上滴加一滴上述DAB显色液，室温显色2-5min（此步可在显微镜下控制显色程度）。

13）自来水充分冲洗。

14）用合适复染剂复染，盐酸酒精分化。

15）继续后续脱水、透明、封片、镜检。

3 结果判定

阳性结果处显处染棕黄或棕褐色。