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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）

Product Introduction

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	YB053D	100 U	-20℃	425.00
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	YB053D	200 U	-20℃	625.00
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	YB053D	500 U	-20℃	1245.00
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	YB053D	1000 U	-20℃	2145.00
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	YB053D	5000 U	-20℃	6745.00

产品描述

重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，本rEK具有比天然酶更高的切割活性。

本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，适用范围广，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，故后续不需将其去除。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	YB053D	YB053D	YB053D	YB053D	YB053D
20401-A	rEK重组肠激酶	100 U	200 U	500 U	1000 U	5000 U
20401-B	10×rEK Reaction Buffer	2 mL×1	2 mL×2	2 mL×5	2 mL×10	2 mL×50

运输和保存方法

冰袋运输。试剂盒内各组分-20°C保存两年，尽量避免反复冻融。

基本特性

来源（Source）	E.Coli
分子量（Molecular Weight）	理论值25.850 kDa
外观（Appearance）	无菌液体
酶浓度（Enzyme Concentration）	10000 U/mL，相当于10 U/uL
活性定义（Activity Definition）	一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量
内毒素检测（Endotoxin）	用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg
质量保证（Quality assurance）	经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性
常见影响肠激酶活性的因素（Influence factors）	2 M尿素，>200 mM NaCl，>20 mM β-ME，>0.1%SDS，>50 mM咪唑，或>5%甘油

应用举例

【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

1）反应体系（1000 μL）

融合蛋白	0.5-1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL）
Enterokinase	1-2 U
10×rEK Reaction Buffer	100 μL
补DDW（超纯水）	To 1000 μL

2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1单位的溶液使用。

注意事项

1）本产品提供适量10×rEK Reaction Buffer, 如实验需求更多Buffe，可按本说明书中提供的配方自行配备。
2）如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释，使得各组分低于干扰浓度后再酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
3）磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
4）本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。

5）蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

FAQ

1）请问可否提供该重组肠激酶酶切效果验证结果？

使用0.1 U本品酶切50 ug底物，反应条件是25℃，酶切不同时间梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）。

QQ图片20180901132631.png

重组肠激酶酶切底物24 h，可完全酶切，更长时间的酶切特异性良好。

2）如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？

本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
注：①如果使用纯化柱，注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10 min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30 min。②如酶切缓冲液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，会影响吸附效果。

附100 mL 10×rEK Reaction Buffer配置方法

1.配置1 M Tris-HCl, pH 8.0，高压灭菌后使用。
2.取50 mL去离子水，加入110.99 mg无水CaCl2充分溶解后，加入1 mL Tween-20充分混匀；
3.加入25 mL高压灭菌的1 M Tris-HCl，pH 8.0，充分混匀。

4.定容至100 mL，-20℃保存。

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