rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶 - 蛋白与免疫 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

反应时间（h）	不同温度下剪切活性（%）
反应时间（h）	4℃	16℃	21℃	30℃
1	34	58	56	70
2	58	80	78	90
3	71	99	99	99
3.5	84	99	99	99

产品性质

来源（Source）	大肠杆菌
外观（Appearance）	无色透明液体
比活力（Specific Activity）	5 U/μL
活性定义（Unit Definition）	在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化（Purification）	Ni柱亲和纯化
纯度（Purity）	≥95%（by SDS-PAGE）

产品组分

编号	组分名称	产品货号/规格
编号	组分名称	20403ES80/1000U	20403ES92/10×1000U	20403ES10/10KU	20403ES50/50KU
20403-A	rTEV Protease（5 U/μL）	200 μL	10×200 μL	2×1 mL	10 mL
20403-B	rTEV Buffer 1（20×）	2 mL	10×2 mL	20 mL	100 mL
20403-C	rTEV Buffer 2（1000×）	50 μL	10×50 μL	500 μL	2.5 mL

运输与保存方法

冰袋运输。

rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2于-20℃保存，一年稳定。rTEV Protease，-20℃保存，6个月稳定；-70℃长期保存，一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存，避免反复冻融。尤其是rTEV Protease，以及rTEV Buffer 2（1000×）。

应用实例

1. 取适量rTEV Buffer 2（1000×）作10倍稀释至rTEV Buffer 2（100×）。

2. 在EP管中配制如下反应体系。

组分	用量
融合蛋白	20 μg
rTEV Protease (5 U/μL)	2-4 μL
rTEV buffer 1（20×）	7.5 μL
rTEV Buffer 2（100×）a	1.5 μL
DDW（超纯水）	up to 150 μL

3. 30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液，置于单独的EP管中。

4. 向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
5. 样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，延长反应时间，并增加rTEV酶用量，以保证酶切效果。

注意事项

1. 影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制剂；2）Zn离子浓度（>5 mM），同样对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	YB062D	1000 U	≤-20℃	986.00
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	YB062D	10×1000 U	≤-20℃	7856.00
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	YB062D	10 KU	≤-20℃	6756.00
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	YB062D	50 KU	≤-20℃	27556.00

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