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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML GST标签蛋白纯化预装柱，5ML

Product Introduction

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML GST标签蛋白纯化预装柱，5ML

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格（元）

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML

GST标签蛋白纯化预装柱，5ML

YB079D

5mL

4℃

938.00

YB079D

5×5mL

4℃

3928.00

产品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。在结构上，该树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML是装填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一种中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。

产品性质

基质（Matrix）	高度交联的4%琼脂糖微球
配体（Ligand）	通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
粒径（Bead size）	45-165 µm
载量（Capacity）	>10 mg GST protein/mL基质（40 kDa）
最大压力（PressureMax）	0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围（pH range）	3-12
储存缓冲液（Buffer）	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液：PBS，pH 7.4（140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4，pH 7.4）

洗脱缓冲液：50 mM Tris-HCl，10 mM 还原型谷胱甘肽，pH 8.0

注：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10 mM DTT。

使用方法

注：样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。

1样品纯化（以Akta为例）

1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

3 填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	清洗树脂
	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除
	样品太黏稠	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg2+（终浓度1 mM），冰上孵育10-15 min
	缓冲液太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速
洗脱组分中无目的蛋白	GST标签蛋白变性了	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准
	过度的裂解使目的蛋白变性	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准
	目的蛋白聚集产生沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10 mM
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	降低结合温度至4℃，充分清洗
	柱子平衡时间太短，目的蛋白不是在pH 6.5-pH 8.0范围内结合	用pH 6.5-pH 8.0的buffer进行充分的平衡，如PBS
目的蛋白没有完全洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中谷胱甘肽浓度太低	增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50 mM Tris-HCl，20-40 mM还原型谷胱甘肽pH 8.0洗脱
	低pH影响洗脱	在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时，提高洗脱液中pH至pH 8-9会有改善
	低pH影响洗脱	增加洗脱液中离子强度，如0.1-0.2 M NaCl
	洗脱液中谷胱甘肽被氧化	使用新鲜配制的洗脱液
	洗脱液中谷胱甘肽被氧化	加入DTT
	非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱	洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20
电泳或Western Blot检测中发现多条带	Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来	Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物，可以在目的蛋白中加入50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4在37℃加热10min去除
	Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来	可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白
	GST融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF
	GST融合蛋白已经发生降解	可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10 mg/mL溶菌酶，25 mM Tris-HCl，pH 8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。
	共价共纯化	包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化，如：DnaK（Mr～70000），DnaJ（Mr～37000），GrpE（Mr～40000），GroEL（Mr～57000），GroES（Mr～10000）
	抗体与E. coli的各种蛋白反应	抗体吸附E. coli蛋白：GST-抗体；超声处理去除GST抗体，可以用Western Blot检测