Protein A/G MagBeads (IP Grade) 蛋白A/G免疫磁珠

产品信息

产品描述

Protein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC)，将Protein A/G高密度定向包被到超顺磁性聚合物微球表面，具有更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度>90%的抗体，使用简便有效。天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG，但是不与狗lgG结合，不结合人lgM、lgD 和IgA。Protein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，实用性更高。同时，本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品适用的范围广泛，可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。

产品性质

运输和保存方法

低温运输。4℃长期储存，有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本操作流程主要为免疫沉淀反应，每次反应使用50 μL Protein A/G MagBeads，可根据需要适当的增加或减少磁珠使用量。

1. 缓冲液配制

2. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法，建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理，使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理：若目标蛋白丰度较高， 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 500 g, 10min），弃上清后称重，按每毫克细胞50 µL的比例用1×PBS洗涤2次；按每毫克细胞5-10 µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液（4℃, 14000 g, 10min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

贴壁细胞样品处理：移去培养基，按每 1.0×105个细胞150µL的比例用1×PBS洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mL EP管内，按每 1.0×105个细胞20-30µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液（4℃, 14000 g, 10min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

大肠杆菌样品处理： 离心收集大肠杆菌（4℃, 12000g, 2min）， 弃上清后称重， 按每克（湿重）菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次；按每克（湿重）菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清（4℃, 17000 g, 10min）。

3. 磁珠预处理

1) 将Protein A/G MagBeads颠倒或漩涡混合均匀。

2) 取50 μl Protein A/G MagBeads 加入新的EP管中。放置在磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃保护液。

3) 将EP 管从磁分离器上取下来，加入200 μL结合液，混匀，放置在磁分离器上，收集磁珠，用移液器吸弃保护液。重复洗2 次。

4. 抗体吸附

1) 加入100 μL结合液将磁珠悬浮，加入目标抗体溶液，充分混匀。

2) 室温孵育10min，可以振荡或漩涡混合均匀。

3) 将EP 管置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

4) 加入500 μL洗杂液混合均匀，置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。重复洗杂至少3 次。

5. 抗原结合

1) 加入含有抗原的样品（通常100-1000 μL)，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。

3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，以备后续检测。

4) 向离心管中加入1mL 洗杂液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然

后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管，再重复洗涤两次。

6. 抗原洗脱

A 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

向EP管上清中加入25 µL 1×SDS-PAG  E Loading Buffer混合均匀，95℃加热5min。将其置于磁力架上，进行磁性分离。收集上清进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。

向EP管中加入50 µL洗脱液混合均匀，室温孵育5min。将其置于磁力架上，进行磁性分离，收集上清液至新的EP管， 并立即加入中和液将洗脱产物pH调节至中性，用于后期功能分析。