Human DiI-Low Density Lipoprotein （Human DiI-LDL） 红色荧光标记人源低密度脂蛋白

产品信息

产品描述

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，简称为LDL）是通过脂蛋白酯酶的水解作用，脱去极低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三脂，释放游离脂肪酸转化而来的。因甘油三酯的去除使得胆固醇所占比例提高，增加颗粒本身密度，从而得到LDL。LDL与脊椎细胞表面的受体特异性结合，然后通过受体介导的内吞作用将胆固醇运输到全身各处细胞。因此，LDL可以用来研究受体介导的内吞作用过程，尤其是在动脉粥样硬化等疾病中，血浆来源的LDL还可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。

红色荧光标记人源低密度脂蛋白（Human DiI-LDL）是标记荧光探针Dil（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的LDL，可以用来观察培养细胞的LDL结合位点，或筛选LDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平，或检测组织内的受体水平。 DiI-LDL是研究细胞内吞作用非常好的标记物。

钰博生物提供的Human DiI-LDL为无菌包装，可以直接稀释使用。除提供DiI-LDL，我们还提供不带标记的LDL，以及修饰化的LDL如乙酰化LDL（Ac-LDL），以及氧化修饰的LDL（Ox-LDL）。

制备方法

纯化的人健康血浆来源的LDL直接标记上DiI荧光探针，然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物，并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

产品性质

运输与保存方法

冰袋运输；

4ºC无菌避光，收到货后可稳定保存6周。千万不可冻存！使用时一定要无菌操作！

注意事项

1）本品的稀释工作液极不稳定，建议即配即用；

2）长期贮存可能会有沉淀析出，属于正常现象，低速离心2 min去除沉淀即可使用；

3）LDL与LDL受体的结合需要Ca2+和Mn2+的参与，过量EDTA的存在会抑制其结合；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操

操作步骤

1）工作液制备：无菌条件下，将DiI-LDL用细胞培养基稀释至20-40 µg/ml。

2）细胞准备：吸除培养板内培养基，向活细胞内加入上述LDL，37℃培养4-5小时。

3）孵育结束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培养基，并用无探针的培养基洗几次。

4）根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

a）荧光显微镜观察

采用标准的罗丹明激发：发射滤光片（或建议使用波长为：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有机溶剂。注：需设阳性细胞以做对照。

b）细胞分选（流式细胞术）

胰蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液，选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照，从而进行流式分选设门（gate）。（建议使用波长为Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。