Protein Silver Stain Kit 蛋白质银染试剂盒

产品信息

产品描述

生化实验中蛋白质通过凝胶电泳的方式分离后需经过染色才能肉眼可见，染色方法有两种：1）染料染色法；2）金属染色法。前者主要是考马斯亮蓝染色法，后者主要采用银染法。前者操作比较简单、省时，但是后者具有较高的检测灵敏性，可检测到10-100 ng蛋白质，比考马斯亮蓝染色法灵敏100多倍。

本试剂盒采用银染的方法，用于检测聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的微量蛋白质。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，1年有效。银溶液、显色液A需避光保存。

注意事项

1）需自备乙醇和冰乙酸（分析纯）

2）显色过程较快，要注意把握时间，避免染色过度。

3）所用器皿要很洁净，不要用手直接接触，以免杂蛋白污染。

4）使用说明中的使用次数及各种溶液的使用量适用于大小为8×10 cm厚度为0.75-1 mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。

5）清洗用水尽量用高纯度去离子水如dd H2O，可以减少背景着色。

6）本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染，并且染色后和后续的质谱检测兼容。

7）使用本试剂盒只需 90 分钟即可完成银染实验。

8）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.试剂配制

1）固定液的配制（自备）： 加入50 mL乙醇、10 mL冰乙酸和40 mL去离子水，混匀。

2）30%乙醇的配制（自备）：70 mL去离子水中加入30 mL乙醇，混匀。

3）增敏液(1×)的配制：99 mL去离子水中加入1 mL增敏液(100×)，混匀。增敏液(1×)配制后需在2 h内使用。

4）银染液(1×)的配制：99 mL去离子水中加入1 mL银染液(100×)，混匀。银染液(1×)配制后需在2 h内使用。

5）显色液的配制：80 mL 去离子水中加入20 mL显色液B(5×)，再加入0.05 mL显色液A，混匀后即为显色液。显色液配制后需在20分钟内使用。

6）终止液的配制（自备）：95 mL去离子水中加入5 mL 冰乙酸,混匀。

2.使用方法

以10 cm²凝胶为例，不同凝胶大小可按比例调整增敏液、银染液和终止液的体积。

1）固定：电泳结束后，取凝胶放入约100 mL固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70 rpm。

2）洗涤：弃固定液，加入100 mL 30%乙醇，在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。弃30%乙醇，加入200 mL去离子水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70 rpm。

3）增敏：弃水，加入100 mL增敏液(1×)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70 rpm。

4）洗涤：弃原有溶液，加入200 mL去离子水，在摇床上室温摇动1min×2，摇动速度为60-70 rpm。

5）银染：弃水，加入100 mL银染液(1×)，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70 rpm。

6）洗涤：弃原有溶液，加入100 mL 去离子水，在摇床上室温摇动0.5 min×2，摇动速度为60-70 rpm。

7）显色： 弃水，加入100 mL显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，直至出现比较理想的预期蛋白条带，摇动速度为60-70 rpm。

8）终止：弃显色液，加入100 mL终止液，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70 rpm。

9）洗涤：弃原有溶液，加入100 mL 去离子水，在摇床上室温摇动0.5 min×2，摇动速度为60-70 rpm。

10）保存显色出的蛋白质条带并记录。