将马EPO抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的EPO与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的EPO抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的EPO呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

1.实验前标准品、试剂及样本的准备；

2.加样（标准品及样本）100μL，37℃孵育2小时；

3.吸弃，加检测溶液A100μL，37℃孵育1小时；

4.洗板3次；

5.加检测溶液B100μL，37℃孵育1小时；

6.洗板5次；

7.加TMB底物90μL，37℃孵育15－25分钟；

8.加终止液50μL，立即450nm读数。