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XL10-Gold 热敏感受态细胞
XL10-Gold 热敏感受态细胞
Product Introduction

XL10-Gold 热敏感受态细胞

XL10-Gold Chemically Competent Cell

产品规格:

XL10-Gold                                  10×100μl

pUC19(control vector)      10pg/μl    10μl

基 因 型

TetrΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte[F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]

简 要 说 明

XL10-Gold 是目前转化效率最高的感受态细胞,由 Stratagene 开发的特异性用于大质粒或珍 贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞。 XL10-Gold 菌株为 Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte 是 Stratagene 开发的特异 性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,已成功应用于 40kd 质粒的构建。 [Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]赋予 XL10-Gold 缺失几乎所有已知的限制酶切系统;同时缺 失核酸内切酶(endA),提高了质粒 DNA 的产量和质量; 重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入 DNA 的稳定性; Tetr, Camr赋予菌株四环素和氯霉素抗性;lacIqZΔM15 的存在使 XL10-Gold 可用于蓝、白斑筛选。 High5TM 系列 XL10-Gold 感受态细胞经特殊工艺制作,经 pUC19 质粒检测转化效率>2× 109cfu/μg。

操 作 说 明

1. XL10-Gold 感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时 迅速插入冰中),加入目的 DNA(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰上静置 25 分钟。

2. 42℃水浴热激 35 秒(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.),迅速放回冰上并静置 2 分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基(2YT 或 LB),混匀后 37℃,200rpm 复苏 60 分 钟。

4. 5000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

注 意 事 项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. XL10-Gold 菌株对 <40 µg/ml 氯霉素有抗性,但对 100 µg/ml 氯霉素敏感。

5. High5TM系列 XL10-Gold 感受态细胞采用常规转化方法,转化效率可达 2×109cfu/μg ; 如果有更高要求,可尝试 Stratagene 公司推荐的标准 protocol。

产品优势

1、蛋白表达:适合表达非毒性蛋白

2、效率高:可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好:-70 度冰箱可保存 6 个月时间

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