DH10B 电击感受态细胞 

DH10B Electroporation-Competent Cell

产品规格:

DH10B 5×50μl

pUC19(control vector) 10pg/ul 10μl

基 因 型

F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 g

alK λ- rpsL nupG

简 要 说 明

High5TM系列 DH10B 感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。

DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富

含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入

DH10B 中)。

recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。

φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。

High5TM系列 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。

High5TM 系列 DH10B 感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测，转化效

率>1010cfu/μg。

操 作 说 明

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使

乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，

冰中静置 5 分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的  High5TM 系列 DH10B 感受态细胞放入冰浴中融化，加入 1 μl 目的 DNA (质

粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重

悬，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。

3. 用 200 μl 枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，使用者也

可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 向电击杯中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空 EP 管中，37℃，200 rpm

复苏 60 分钟。

6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。将平

板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13h。

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. 当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

3. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转

化效率下降一个数量级。

4. 对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀 DNA 后适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM

EDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化

效率，增加打火的风险。

5. 混入质粒时应轻柔操作。

6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃