BJ5183 电击感受态细胞 

BJ5183 Electroporation-Competent Cell

产品规格:

BJ5183 Electroporation-Competent Cell 50μl×5

pUC19 (control vector, 10pg/μl) 10μl

基 因 型

endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)

简 要 说 明

BJ5183 是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183 菌株含有 sbcBCrecBC 双重突变，赋予 BJ5183 细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒

{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或 pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5

genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA

的提取。Strr 赋予 BJ5183 菌株链霉素抗性。BJ5183 电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效

率>1010cfu/μg DNA。

操 作 说 明

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙 醇充分挥

发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中 静置 5 分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的 BJ5183 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手拨

打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 悬，DNA 浓度

不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。 3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪

推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击

杯底部数次混匀后，转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心管等），向离心管中 补加 S.O.C. 培养基至 10

ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。

6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂

板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

2% Tryptone

0.5% Yeast Extract

10 mM NaCl

2.5 mM KCl

10 mM MgCl2

10 mM MgSO4

20 mM glucose

PH-7.0

S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain

S.O.C 培养基配方

maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).-

1.加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个

数量级。6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产

物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓

度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃