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Rosetta-gami(DE3)pLysS 热敏感受态细胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS 热敏感受态细胞
Product Introduction

Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞 

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

产品规格:

Rosetta-gami(DE3)pLysS 10×100μl

pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl

基 因 型

Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR , StrR , TetR )

High5TM系列 Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表达菌株的优势:

* Rosetta-gami 赋予其 Rosetta 和 Origami 的优点——补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子

(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA) 对应的 tRNA,提高外源基因的表达水平,并且包含突变

的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基

因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。

* 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶),适合 T7 启动子诱导的

蛋白表达。

* 该菌株携带的 pLysS 质粒含有表达 T7 溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰

IPTG 诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株具有卡那霉素,氯

霉素,链霉素,四环素抗性,经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg。

简 要 说 明

1. 取 100μl 冰上融化的 Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,

冰上静置 25 分钟。

2. 42 回冰上并静置 2 分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基(2YT 或 LB),混匀后 37℃,200rpm 复苏 60 分

钟。

4. 5000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或

LB 培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG 浓度可选(0.1-2mM 均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG 浓度需实验者优化。

6.BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS 质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应

含有 34 µg/ml 氯霉素,以防质粒丢失。

7. 具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。

产品优势

1、蛋白表达:适合表达非毒性蛋白

2、效率高:可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好:-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件: -80℃

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