GV3101 电转农杆菌感受态细胞

GV3101 Electroporation-Competent Cell

产品规格:

GV3101 10×50μl

pCAMBIA2301（control vector） 10ng/ul 10ul

基 因 型

C58 (rif R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR/strepR) Nopaline

简 要 说 明

GV3101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化

操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因

（vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能

被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移）。

pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签：Strep 和 gent，赋予 GV3101 菌株链霉素和庆大霉素

抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。

开发的 GV3101 电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pCAMBIA2301 质粒(size:11633bp)

检测转化效率可达5×104cfu/μg；经 pCAMBIA2301-ZH 质粒（size:40kd）检测转化效率可达 5×103cfu/μg。

1. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使

乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5cm 以方便盖上杯盖，冰

中静置 5 分钟充分降温。

操 作 说 明

2. 取-80℃保存的  农杆菌感受态插入冰中 5 分钟，待其融化，加入 1-5ug 质粒 DNA（质粒体

积不大于 6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用 200ul 枪头

将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此参数为 Biorad 推荐，使用者也可按

所用电转仪推荐的 protocol 操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入 700ul 无

抗生素的 LB 并转移到感受态空管中，28℃振荡培养 2~3 小时。

4. 6000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50ug/ml kan 时，28℃培养 48h 即可；平板

中同时加入 50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有 50ug/ml rif 则需要

28℃培养 72-90h）。

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃