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EHA105 化转农杆菌感受态细胞
EHA105 化转农杆菌感受态细胞
Product Introduction

EHA105 化转农杆菌感受态细胞

EHA105 Chemically Competent Cell

产品规格:

EHA105 10×100μl

pCAMBIA2301(control vector) 10ng/ul 10ul

基 因 型

C58 (rif R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strepR) Succinamopine

简 要 说 明

EHA105 菌株由 EHA105 菌株改造而来,为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平

抗性基因 rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105

(pTiBo542DT-DNA) ,此质粒含有 vir 基因(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pEHA105

(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。

pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签:strep,赋予 EHA105 菌株链霉素抗性,适用于

水稻、烟草等植物的转基因操作,经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率可达 104cfu/μg。

1. 取-80℃保存的  农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2. 每 100μl 感受态加 1ug(体积不大于 10ul)质粒 DNA,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置 5 分钟、

液氮 5 分钟、28℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。

操 作 说 明

请 使用老师 必须严格按照 我们的产品说明书进行操作,谢谢。这很重要,谢谢。

3. 加入 700μl 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基,于 28℃振荡培养 2~3 小时。

4. 6000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天(当平板只含有 50ug/ml kan 时,28℃培养 48h 即可;平板

中同时加入 50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需 28℃培养 60h;如果使用的平板含有 50ug/ml rif 则需要

28℃培养 72-90h)。

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

产品优势

1、蛋白表达:适合表达非毒性蛋白

2、效率高:可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好:-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件: -80℃


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