LBA4404 电转农杆菌感受态细胞

LBA4404 Chemically Competent Cell

产品规格:

LBA4404 10×100μl

pCAMBIA2301（control vector） 10ng/ul, 10ul

基 因 型

Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine

简 要 说 明

LBA4404 菌株为 Ach5 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转

化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404，此质粒含有 vir 基因（vir 基因是

T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pAL4404 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双

元载体 T-DNA 顺利转移）。

pAL4404 型 Ti 质粒含有筛选标签：strep，赋予 LBA4404 菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等

植物的转基因操作，经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率可达 10

4cfu/μg。

1. 取-80℃保存的 农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2. 每 100μl 感受态加 1ug（体积不大于 10ul）质粒 DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 5 分钟、

液氮 5 分钟、28℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。

3. 加入 700μl 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时。

4. 6000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

操 作 说 明

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50ug/ml kan 时，28℃培养 48h 即可；平板

中同时加入 50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有 50ug/ml rif 则需

要 28℃培养 72-90h）。

1.  感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃