EHA101 化转农杆菌感受态细胞

EHA101 Chemically Competent Cell

产品规格:

EHA101 10×100 μl

pK7WGF2 (control vector) 10 ng/μl 10 μl

基 因 型

C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR) Nopaline

简 要 说 明

EHA101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化

操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir

基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA

转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。

pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型 Ti 质粒含有筛选标签：strep、kan，赋予 EHA101 菌株链霉素抗性和

卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作，经 pK7WGF2 质粒检测转化效率可达

104 cfu/μg DNA。

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2. 每 100 μl  感受态加 1 μg（体积不大于 10 μl）质粒 DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上

静置 5 分钟、液氮 5 分钟、28℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。

3. 加入 700 μl 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基，于 28℃，200rpm 振荡培养 2~3 小时。

操 作 说 明

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天。

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下

降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50 μg/ml kan，若所用平板同时含有 20 μg/ml rif 则转化

效率降低到 1/2。

4. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素

可防止 Ti 质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大

霉素，Ti 质粒丢失的概率极低 (可以忽略)。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃