Y2HGold 酵母感受态细胞 

Y2HGold Chemically Competent Cell

产品规格:

Y2HGold 10×100μl 保存条件：-80℃

PGADT7（control vector） 10ng/μl 10μl 保存条件： 4℃

Carrier DNA 5ug/μl 100 μl 保存条件： -20℃

PEG/LiAc 3.5 ml 保存条件： 4℃

基 因 型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ,LYS2 : : GAL1UAS–Gal1TATA–

His3, GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2 URA3 : : MEL1UAS–Mel1TATA AUR1-C MEL1

Y2HGold 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4 系统酵母双杂实验用菌株，MATa 型，可直接转化质粒或

与 MATα型酵母菌株 Y187 通过 mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。

Transformation marker 为: trp1, leu2，报告基因为：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1。

Y2HGold -GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7 和 PGADT7。

质粒 PGBKT7 的筛选标志为 TRP1，用于表达 DNA-BD(来自酵母转录因子 GAL4N 端 1~ 174 位氨基酸)

与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；

质粒 PGADT7 的筛选标志为 LEU，用于表达 AD(GAL4 C 端 768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白（Prey）

的融合蛋白。

GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子 GAL4 可分为功能上相互独立的两个结构域：位于 N 端 1 ~

174 位氨基酸区段的 DNA 结合域（DNA-BD）和位于 C 端 768 ~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。

简 要 说 明

DNA-BD 能够识别 GAL4-responsive gene 的上游激活序列 UAS，并与之结合。

而 AD 可以启动 UAS 下游的基因进行转录。BD 和 AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈

现完整的 GAL4 活性，使含有 UAS 的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与 AD 结合，将要

检测的蛋白质分别与 BD 和 AD 融合，形成 bait 融合蛋白（bait -BD）和 prey 融合蛋白（prey-AD），

如果 bait 和 prey 发生相互作用，就会促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的 GAL4，从而激活报告基

因的转录。

Y2HGold 有四个报告基因：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1，分别由三种不同的启动子（G1，G2，M1）启

动，这三种启动子只有 GAL4 识别的 17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性

发生的概率。此外新报告基因 AbAr 与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低

酵母双杂假阳性发生的概率。 High5

TM系列 Y2HGold 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保

存三个月，经 PGADT7 质粒检测转化效率>10

4cfu/μg DNA 。

1. 取 1 管感受态细胞置冰上融化，6 000 rpm 离心 1min，去掉上清。

2. 加入 320 μl LiTE/PEG 溶液，重悬细胞，然后加入 10μl Carrier DNA(95-100 度 5min 快速冰浴，

重复一次)，预冷目的质粒 2-5ug,体积不多于 20ul（对酵母双杂交实验而言加入 10 μl pGADT7 质粒（约

1 μg），10 μl pGBKT7 质粒（约 1 μg））。

3. 充分混匀，于 30 度 250 rpm 转速下培养 30 min。

4. 42 度热激 2.5min。

5. 6000 rpm 离心 1min，去掉上清。

6. 加入 1 ml TE 溶液，温和重悬细胞。

7. 6000 rpm 离心 1min，去掉上清。

8. 加入 100 μl TE 溶液，重悬细胞，将细胞涂布于相应的营养缺陷型固体合成培养基（对酵母双杂交

实验而言为 Trp 和 Leu 双营养缺陷型合成培养基）。

9. 30 度倒置培养 48-96h，直至形成大小合适的酵母菌落。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃