EGY48 酵母感受态细胞 

EGY48 Chemically Competent Cell

产品规格:

EGY48 10×100μl 保存条件： -80℃

PGBKT7（control vector） 10ng/μl 10μl 保存条件： 4℃

Carrier DNA 5ug/μl 100 μl 保存条件： -20℃

PEG/liAC 3.5 ml 保存条件： 4℃

基 因 型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

简 要 说 明

EGY48 菌株是 Clontech 公司开发的 LexA 系统酵母双杂实验用菌株，MATa 型，可直接转化质

粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation marker 为: his3, trp1, ura3，报告基因为：LEU2；

报告基因 UAS（上游激活序列）来源于 LexA op(x6)，只有当 Bait 和 Prey 互作时才能启动 LEU2 表达。

EGY48-LexA 酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。

质粒 pLexA 的筛选标志为 HIS3，用于表达 DNA-BD(来自原核的 202 个氨基酸残基组成的 LexA 蛋白)与目

标蛋白(Bait)的融合蛋白；

质粒 pB42AD 的筛选标志为 TRP1，用于表达 AD(来自疱疹病毒的 88 个氨基酸残基组成的 B42AD 蛋白)与

目标蛋白（Prey）的融合蛋白；

报告质粒 p8op-LacZ 的筛选标志为 URA3，报告基因为 LacZ，报告基因 UAS 来源于 LexA op(x8) ，只有

当 Bait 和 Prey 互作时才能启动 LacZ 表达。 High5TM 系列 Y2HGold 感受态细胞经特殊工艺制

作，-80℃可保存三个月，经 PGBKT7 质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA 。

操 作 说 明

1. 取 1 管感受态细胞置冰上融化，6 000 rpm 离心 1min，去掉上清。

2. 加入 320 μl LiTE/PEG 溶液，重悬细胞，然后加入 10μl Carrier DNA(95-100 度 5min 快速冰浴，

重复一次)，预冷目的质粒 2-5ug,体积不多于 20ul（对酵母双杂交实验而言加入 10 μl pGADT7 质粒（约

1 μg），10 μl pGBKT7 质粒（约 1 μg））。

3. 充分混匀，于 30 度 250 rpm 转速下培养 30 min。

4. 42 度热激 2.5min。

5. 6000 rpm 离心 1min，去掉上清。

6. 加入 1 ml TE 溶液，温和重悬细胞。

7. 6000 rpm 离心 1min，去掉上清。

8. 加入 100 μl TE 溶液，重悬细胞，将细胞涂布于相应的营养缺陷型固体合成培养基（对酵母双杂交

实验而言为 Trp 和 Leu 双营养缺陷型合成培养基）。

9. 30 度倒置培养 48-96h，直至形成大小合适的酵母菌落。

Preparation of Media：

YPDA （1L）:

Tryptone 20g

yeast extract 10g

0.2% adenine 15ml

补水到 950ml， 用盐酸调 PH 到 6.5

Agar 20g (for plates only)

121 度，15 分钟高压灭菌，待培养基温度降到 55 度时，加入已过滤的 40% 葡萄糖 50 ml

0.2% adenine(1L)

Adenine 2g

补水 到 1L 溶解后高压灭菌或 0.22um 滤膜过滤除菌

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

4.EGY48 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27-30℃；高于 31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板

为例：涂 YPDA 平板 29℃，48h 培养可见直径 1mm 克隆；涂 SD 单缺平板 29℃，48-60h 培养可见直径 1mm

克隆，涂 SD 双缺平板 29℃，60-80h 培养可见直径 1mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺平板平板 29℃，80-90h

培养可见直径 1mm 克隆。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃