精提酵母tRNA溶液B，5mg/mL

产品及特点 本产品分 A 和 B 两个纯度级别，浓度均为 5mg/mL。A 是酵母 tRNA 粗提液，用作制备更高纯度（如分子生物级）酵母 tRNA 的原材料或斑点杂交液添加成分。

B 是精提液，是经过本公司柱式 RNAclean 纯化的分子生物学级别的酵母 tRNA 溶液，不含蛋白质和 DNA 污染，OD260/OD280 在 1.9 左右，可直接用作微量 RNA提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern 杂交的封堵剂，对于探针为 RNA 的杂交试验尤其适用。

规格及成分 70904A 包装

成 份 编 号 塑料袋包装

tRNA 溶液粗提液 70904a 1.5 mL

使用手册 70904sc 1 份

70904B 包装

成 份 编 号 塑料袋包装

tRNA 溶液精提液 70904b 或 1.5 mL

使用手册 70904sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年

自备试剂 根据情况

使用方法 一：以 tRNA 粗提液（70904a）为材料，酚法制备 tRNA 精提液（70904b）

1. 在 1 倍体积的 tRNA 粗提液中加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚，振荡混匀后12000-15000 g 离心 3 分钟得上清。

2. 在上清中再加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚和 0.2 倍体积自备的氯仿，振荡混匀后 12000-15000 g 离心 3 分钟得上清。

3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要 2-4 次抽提。

4. 在上清中加入 0.1 倍体积的自备 3M NaAc（pH5.2）和 2 倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。

5. 12000-15000 g 离心 15 分钟以上，小心移弃上清。

6. 用 1mL 自备 75%乙醇洗一次（即加入 1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000-15000 g 离心 5 分钟，小心移弃上清）。

7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母 tRNA，可以溶解在自备的 DEPC 水中，UV 测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。

注意：tRNA 比较短，又是单链，所以电泳时结合 EB 等染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。

注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式 RNAclean 精提，详细过程见该产品使用手册。

二：tRNA 精提液（70904b）作为核酸助沉剂

1. 在核酸(DNA 或/和 RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

盐 终浓度

NH4OAc (醋酸铵） 0.5 M

NaCl (氯化钠) 0.25 M

NaOAc (醋酸钠） 0.3 M

2. 加入本产品使其终浓度为 20 ug/mL，混合均匀。

3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。

4. 冰上放置 15 分钟。

5. 12000-15000 g 离心 15 分钟以上，小心移弃上清。

6. 用 1mL 75%乙醇洗一次（即加入 1mL 75%乙醇，振荡混匀后 12000-15000

g 离心 5 分钟，小心移弃上清）。

7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。

8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。

注：由于 tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的 DNA 或RNA 要用于此类反应，就不能使用 tRNA 作为助沉剂。如果回收的 RNA 要用于RT-PCR，使用 tRNA 可能会对反应的特异性产生干扰。

二：tRNA 精提液（70904a 或 70904b）作为杂交封堵剂tRNA 粗提液可以作为菌斑杂交液的封堵成分，tRNA 精提液可以作为原位杂交液、Northern 杂交液和 RNA 斑点杂交液的封堵剂，也可以作为 Southern 杂交液和 DNA 斑点杂交液的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为 100ug/mL。如果使用 RNA 探针，最好使用 tRNA 精提液做封堵剂，以保护 RNA 探针。