克必隆B载体

英文名称：

运输：低温

保存：负20度

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

本产品是在LMAI Bio克必隆G载体的基础上开发的专门用于高效快速克隆平末端DNA段的专用载体，它是由SmaI酶切克必隆G载体后经过纯化得到的即用型线性载体。跟克必隆G载体一样，本产品带有自基因，SmaI位点位于该基因之中，只有当外源平末端DNA插入片段插入SmaI位点，连接后的DNA转化的细胞才能生长，所以最后得到的转化子几乎都是含有平末端DNA插入片段的重组子。
1、 即用性，可以直接用于连接反应，免去繁琐的酶切，电泳检测，纯化，去磷酸化，再纯化等步骤。
2、 具有克必隆-G载体的所有优点，包括零背景，适用于所有E.coli菌株，多拷贝的colEI型复制起始位点。
3、 高效率，由于杀基因的使用有效地减除了载体自身环化对平末端DNA克隆的影响，自身环化得到的转化子在有选择液存在时只占总转化子的1%-5%。
4、 应用广泛，可用于克隆酶切产生的平末端DNA，Pfu酶扩增的PCR片段，cDNA段，3'-和5'-RACE片段，Taq酶扩增的PCR片段（部分为平末端）。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。