石蜡包埋切片蛋白提取试剂盒

产品及特点石蜡包埋组织是很重要的临床材料，研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特 别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于判断癌化的进展，癌症的类型的判 定，以方便于诊断和治疗有重要的意义，然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水 平并不能够真实反映体内细胞的真实状况，因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且 加以研究有很重要的意义，本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试 剂，在两种不同的温度条件下温育，可以将被铰链的蛋白质释放出来，经过简单 的离心步骤，上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等，本试剂盒可以使 用50次左右。 本产品有下列特点：

1. 不含有去污试剂，适用于非染色的标本。
规格及成分 成 分 编 号 小扁盒包装
预处理试剂 A YB-440R 100 mL
预处理试剂 B YB-440R 5 mL
提取试剂 YB-440R 5mL
沉淀试剂 YB-440R 75mL
DTT 干粉 YB-440R 80mg
使用手册 YB-440R 1份

运输及保存 常温下运输和保存，但 DTT 和提取试剂需要 4℃保存，盛装预处理试剂 A 的瓶 子已经密封，请在使用后，将剩余的预处理试剂 A 倒入一个有内盖的瓶中，同 时盖紧内外盖，以防止挥发。盛装预处理试剂 A，B 和沉淀试剂的瓶盖要盖紧， 同时避免火源。

自备试剂 超纯水 

使用方法

1. 取两块大约10-15 μm厚，100 mm2石蜡包埋组织切片到1.5 mL 的干净 离心管中，加入1mL 预处理试剂A，高速涡悬震荡30 sec，室温静置5 min， 期间偶尔颠倒离心管数次。

2. 加入100 μL预处理试剂B，涡悬震荡10 sec，再10000 rpm（10000 g） 离心2 min，移去上下两层的液体。

3. 用500 μL的超纯水清洗脱蜡的组织两次，离心并尽量吸去液体，保留组织 块沉淀。

4. 加入100μL提取试剂（用前需要将DTT全部加入到装提取试剂的瓶中，摇晃 混匀，未用完的提取试剂需要4℃放置），盖上盖子，涡悬震荡数秒。

5. 在水浴锅中100℃加热20 min，短暂离心一下，再用组织研磨棒将切片组 织磨碎。

6. 在水浴锅中60℃加热2 hour，期间大约每20 min取出，震荡一次。

7. 4℃，12000 rpm（12830 g）离心15 min，小心将上清转移到一个新的 1.5 mL 的干净离心管中。注意：在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件 下保存一个星期，如果需要长期保存，请放置在-20℃的环境中，同时避免 反复冻溶，也可以使用我公司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒对上清中 的蛋白质直接定量。

8. 加入1 mL 的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min。

9. 4℃，12000 rpm离心15 min，去除上清，保留沉淀。

10. 加入0.5 mL的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min， 再4℃，12000 rpm离心15 min，去除上清， 保留沉淀，在通风橱中将试 管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。

11. 将固体沉淀溶解于合适的自备的缓冲液中，再4℃，12000 rpm 离心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等实验。注意：此上清 中含有DNA，RNA 残留，所以溶液有些发粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase 等消化，有助于减少粘性，但是即使不处理一般不 会影响后续实验，用枪头将沉淀捣碎。建议使用含有Thiourea ，Urea， NDSB-201 或其它强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶 解。 

2. 可以适用于甲醛浸泡的组织标本。

3. 不需要超速离心，可以同时处理多个标本。