Bradford法蛋白定量试剂盒

产品及特点Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下， 考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其大吸光 值也由 465 nm 转移到 595 nm，通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。

本 产品是基于 Bradford 法蛋白检测原理开发的产品，具备下述特点：

1. 快速，10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。

2. 稳定，加样混匀后 2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过 10%。

3. 线性范围在 50～1000 μg/mL。

4. 最小测量体积为 1-20 uL，低测量蛋白量为 0.5 ug。

5. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。

6. 有常规和微量两种检测模式。
规格及成分 成 分 编 号 小纸盒包装
溶液 A YB-444R 250 mL（棕色瓶）
BSA 标准（2 mg/mL） YB-444R 1 mL
定性滤纸（直径 12.5cm） YB-444R 50 张
使用手册 YB-444R 1 份

运输及保存 常温运输和保存，BSA 标准需低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备仪器试剂 超纯水、分光光度计

使用方法

一、制备溶液 A 工作液

1. 将试剂盒提供的溶液 A 与自备的超纯水按 1：4 比例充分混合即为溶液 A 工作 液 (例：4 mL 溶液 A + 16 mL 超纯水= 20 mL 溶液 A 工作液)。每次配制多 少取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计算。

2. 用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液 A 工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定 使用 1-2 星期。注意：不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过 的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。

二、制备 BSA 标准品梯度稀释液

3. 测试开始之前，应首先制备 BSA 标准品梯度稀释液。本试剂盒使用 BSA 作为 标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度具体 需要多少体积取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计算。没有 用完的 BSA 标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。

a) 如果进行常规检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2 mg/mL） 稀释成下面的 8 个浓度： 0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、 500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL

b) 如果进行微量检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2 mg/mL） 稀释成下面的 6 个浓度： 0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL

三、常规检测流程

常规检测法在蛋白浓度 30 - 1000 μg/mL 范围内呈现 R 2 = 0.996 的直线线 性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。

4. 在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 8 个个 BSA 梯度稀释液，然后 再在每个离心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。终体积多少取决于比色 杯的体积。 如果用 3 mL 比色杯检测，则取 100 μL 样品+5 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯检测，则取 40 μL 样品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，则取 20 μL 样品+1 mL 溶液 A 工作液。

5. 样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

6. 室温放置 5 分钟。

7. 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有 气泡，否则气泡会对增加吸光度的读数。

8. 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。

四、微量检测流程

此方法在蛋白浓度 1～20 μg/mL 范围内呈现 R 2 = 0.992 的直线线性回归， 可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。再在每个离心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。终 体积多少取决于比色杯的体积。 如果用 3 mL 比色杯检测，则取 4 mL 样品+1 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯检测，则取 2 mL 样品+0.5 mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，则取 400 μL 样品+100 μL 溶液 A 工作液。

10. 样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

11. 室温放置 5 分钟。

12. 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有 气泡，否则气泡会对增加吸光度的读数。

13. 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。