超敏型BCA法蛋白定量试剂盒

产品及特点

本产品是在 BCA 法蛋白定量试剂盒（CAT#:80815-500）基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒，尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。它具有下列特点。

1. 超敏感，最低检测浓度为 0.5μg/mL。

2. 线性范围在 0.5～20μg/mL，尤其适用于低浓度的样品。

3. 对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感，但对 Cu 的还原剂和螯合剂敏感。

4. 比 Lowry 法更加简单快捷，45 分钟内完成测定。

5. 试剂稳定，但工作液 1 天内有效。

6. 终产物稳定，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

7. 最短可以检测双肽，所以适合于分子量较小的蛋白质，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白质。

运输及保存 常温运输和保存，但 BSA 标准品需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 样品缓冲液 

使用方法

1. 用合适的方法制备待测蛋白样品，并把蛋白质溶解在合适的样品缓冲液中。

本检测方法受待测样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保蛋白溶液中，

EDTA 的终浓度不高于 10mM、二硫苏糖醇不高于 1mM、β-巯基乙醇不高

于 1mM，没有任何 EGTA。如果达不达上述要求，则需要稀释样品，使其

浓度降低到上述浓度之下。

2. 将本试剂盒提供的 BSA 标准品（2 mg/

溶液 C 混合即可，所得溶液即超敏 BCA 工作液。

4. 取一块 96 孔板，按下表加入上步新鲜制备的 BSA 工作液、待测蛋白样品和

自备样品缓冲液：

编号 BSA 工作液

（μL）

待测样品

（μL）

样品缓冲液

（μL）

总体积

（μL）

蛋白含量

（μg）

0 0 0 150 150 0

1 5 0 145 150 0.2

2 10 0 140 150 0.4

3 20 0 130 150 0.8

4 40 0 110 150 1.6

5 60 0 90 150 2.4

6 80 0 70 150 3.2

7 100 0 50 150 4.0

N 个待测样品 0 μL 补到 150 150 待测

5. 在每个孔中加入 1 倍体积（即 150 μL）的超敏 BCA 工作液并混匀。如果用

排枪加入并混匀则更好。也可把 96 孔板放在振荡器上振荡 30 秒混匀。

6. 60℃放置 1 小时。

7. 冷至室温，迅速在 562 nm 下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有

562 nm 的设定，可用接近的波长检测，如 570nm。测定操作最好在 10 分

钟内完成，否则化学反应还在继续进行，光吸收值每 10 分钟会升高 2.5%左

右。

8. 处理数据：将编号为 0 号的样品（对照）的读数从其余所有样品（包括 0 号

样品，其读数变成零）中扣除。

9. 制作标准曲线：以 0-7 号样品的 BSA 含量（单位 μg，见上表最右行）为横

坐标，以上一步得到的样品吸光值（扣除背景读数的）为纵坐标，绘出 BSA

的标准曲线。

10. 再将 N 个待测样品的吸光值（减去 0 号样品的读数后）标在标准曲线上，其

在横坐标上对应的蛋白含量（μg）就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品

稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：

μg/μL）。

二：注意事项

11. 加工作液后也可以在室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。超敏 BCA 法

测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温

度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在 60℃孵育 60 分钟。

12. 待测样品浓度在 20～2000 μg/mL 范围时有较好的线性关系。

13. 超敏 BCA 法测定蛋白浓度时，不受下列化学物质的影响：

名称 浓度小于下面数值时不受影响

Ammonium S μLfate 1.5 M

Brij-35 5.0%

CHAPS 5.0%

EDTA 10 mM

Hepes 100 mM

Glycine, pH 2.8 100 mM

Guanidine HCl 4.0 M

Tween 20、60、80 5.0%

SDS 5.0%

Sodium Acetate pH 5.5 200 mM

Sodium Chloride (NaCl) 1.0 M

Sucrose 40%

Sodium Hydroxide (NaOH) 0.1 M

NP-40 5.0%

Triton X-100 5.0%

Urea 3.0 M

本试剂受温度和时间影响较大，故需要准确定时和定温，以保证精确定量。