Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶

产品信息

产品描述

Hifair^®ⅡReverse Transcriptase是在Hieff^®M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff^®M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair^TM ⅡReverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。

产品组分

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

活性定义

以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期18 个月。

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

3. 逆转录程序设置

【注】：

1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略。

2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50℃。

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。