Hifair® IV Reverse Transcriptase 第四代耐热逆转录酶

产品信息

产品描述

Hifair^® IV Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受60℃，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Hifair® IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。

产品组分

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

活性定义

以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind IV，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；

核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；

RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37 ºC下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。

运输与保存方法

冰袋运输。

-20 ºC保存。有效期一年。

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均应在冰上进行，防止发生RNA降解；

3）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应液配制

3. 逆转录程序设置

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃-60℃；

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。