BCECF,AM (pH荧光探针)（Cell permeant）

产品信息

产品描述

BCECF是一种比率型pH荧光指示探针，Ex=503 nm，Em=530 nm。联合现代化的荧光成像技术，使其在涉及pH变化的多种实验中得到广泛应用，如细胞生长调节，钙调节，受体介导的信号转导，铁离子运输内吞等。

BCECF,AM是BCECF基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。BCECF,AM本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成BCECF，后者被滞留在细胞内，随pH变化发出绿色荧光。

产品性质

运输与保存方法

室温运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

注意事项

1）对于微量试剂，开封前，请稍微离心一下，以保证粉末落入管底。
2）由于BCECF,AM对湿度非常敏感，本粉末保存的过程中一定要保持干燥。对于配制好的BCECF,AM储存液需要分装冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。

3）BCECF,AM工作液必须现配现用。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（该方案仅做参考，具体染色时需根据细胞类型，细胞状态及其他条件进行优化。）

1. 储存液的配制

加入高质量无水DMSO将其配制成1-20 mM的储存液。建议使用前进行配制，暂时不用的储存液务必按照每次使用量分装后于≤-20℃避光冻存。避免反复冻融！！！

2. 染色步骤

1）细胞准备

按照96孔板每孔100 uL 4～8×104个细胞，384孔板每孔25 uL1～2×104个细胞对细胞进行铺板使其过夜生长。

注：对于不同的细胞需参照文献对细胞密度进行优化调整。

2）BCECF,AM工作液的配制

根据具体使用量，取适量上述配制的储存液，用HHBS（Hanks and 20 mM Hepes buffer）缓冲液稀释成2-50 µM工作液。

3）染色。

分别加入等体积的BCECF,AM染液（96孔板，每孔加入100 µL; 384孔板每孔加入25 µL），于37℃细胞培养箱内孵育30-60 min。

注：a. 染色液中不能含有血清，因为血清中可能含有内源性酯酶活性，因此应避免；

       b. 染色液中不能含有氨基酸，因为存在的脂胺可能会断裂AM基团，阻止染料的加载。

4）清洗

吸除染液，用HHBS清洗细胞2次。

5）加入适当量复合物后观察荧光强度变化。

使用合适荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。可用490 nm、430 nm激发波长，530 nm发射波长对其进行比率测定。