IgG MagBeads, Goat anti-Mouse 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠

产品信息

产品描述

免疫磁珠分离技术是以高均一性的磁性微球为固相支持物，将免疫配基通过功能基团结合到磁性载体上形成的免疫磁性微球，利用免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性，实现特异性靶物质分离的技术，具有特异性强、灵敏度高、效率高、操作简单等特点。

应用羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠可根据实验需要选择各种小鼠单抗实现细胞分离。通常使用以下两种分离方式：阳性分离或阴性分离。阳性分离是直接从细胞混合液中分离靶细胞，阴性分离是利用免疫磁珠去除无关细胞，收集游离于磁场中的靶细胞。

羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠可通过直接法或间接法实现细胞分选。直接法是将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与免疫磁珠表面的羊抗鼠IgG结合，将磁珠结合的细胞与其它细胞分开，达到细胞分选的目的。间接法是先将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与混合体系中靶细胞表面特异抗原结合，再与羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠结合达到细胞分选的目的。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃保存。有效期6个月。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）请勿冻存、干燥、加热或离心操作，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3）产品使用前需剧烈振荡或超声处理，避免磁珠沉降聚集。

4）磁珠分选缓冲液，推荐使用 PBS，0.5% BSA，2 mM EDTA，0.09%NaN3，pH7.4。
5）Fc受体（FcR）封闭：在某些实验中，部分抗体会通过其Fc段与不同细胞表面的FcR结合，出现非特异性反应。此时可预先将细胞与IgG或针对FcR的特异性抗体室温孵育5-10 min，一般107细胞中可加入1-10 µg IgG或FcR的特异性抗体进行封闭；反应体系中也可加入5-10%蛋白降低非特异性反应，但蛋白浓度太高会降低分选效率。

6）实验前应对抗体使用浓度，磁珠与细胞反应比例，反应时间等参数优化以达到最佳的细胞分选效果。
7）如果分选的细胞进一步用作细胞培养实验，全过程注意无菌操作，分选缓冲液中可不加防腐剂NaN3，磁珠保存液中的防腐剂可用适量无菌缓冲液或细胞培养基洗2次以去除。

使用方法

以下为常规操作方式，建议根据具体实验，优化实验方法。
1）从抗凝血中提取外周血单个核细胞（PBMC），用PBS，5% BSA，0.09% NaN3，pH7.4洗3次，40-70 µm尼龙网过滤去除细胞团块和碎片，调整细胞数为1×108 /mL。

2）加入适量Mouse IgG，一般1×107 PBMC中加入0.1-20 µg抗体，室温反应30 min。

3）1000 rpm离心5 min，弃上清。加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞，1000 rpm离心5 min，弃上清，洗2次（2×1 mL）。
4）1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞，加入50 µL免疫磁珠，室温反应30 min，间隔10 min轻晃反应管，避免磁珠沉淀，使磁珠与细胞充分反应，尽量防止出现气泡。阴性分选采用步骤5-7，阳性分选采用步骤8-9。

阴性分选步骤

5）应用磁分离器分离5-8 min，收集未被免疫磁珠结合的细胞悬液至另一干净管中。

6）加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬磁珠，用玻璃滴管或移液枪枪头反复吹打磁珠。

7）重复步骤5，合并两次收集的细胞悬液，可将细胞悬液再次置于磁分离器中分离5-8 min，可明显增加靶细胞纯度。

阳性分选步骤

8）应用磁分离器分离5-8 min，去除未与磁珠结合的细胞。
9）结合了靶细胞的免疫磁珠用1 mL磁珠分选缓冲液洗5次（5×1 mL）后，可直接进行流式检测，或置于37℃培养48 hrs可使细胞与磁珠分离。