Lymphocytes Subgroup Typing Kit (Human) 人淋巴细胞亚群分析试剂盒

产品信息 

产品描述

根据生物学功能及细胞表面的抗原表达，可以将人外周血淋巴细胞分为三群：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞。T淋巴细胞的作用主要是参与特异抗原介导的细胞免疫反应，并调节B淋巴细胞分泌免疫球蛋白。T淋巴细胞按其功能又可进一步分为辅助/诱导性T细胞和抑制/细胞毒性T细胞。NK细胞，即自然杀伤细胞，介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒作用，而不依赖于MHC Ⅰ类和Ⅱ类分子的存在。

人淋巴细胞亚群分析试剂盒是由一系列双色荧光标记抗体组成的试剂盒，主要用于检测外周血淋巴细胞各亚群占总淋巴细胞的百分率，即成熟T淋巴细胞（CD3＋）、辅助/诱导性T细胞（Th/i :CD3＋CD4＋）、抑制/细胞毒性T细胞（Ts/c: CD3＋CD8＋）、B淋巴细胞（CD19＋）和NK细胞（CD3－CD16＋和/或CD56＋）；还可以计算出Th/Ts（CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋）细胞的比例。

相对于传统的分析淋巴细胞亚群的方法，流式细胞术将抗体的特异性和流式细胞仪分析单个细胞的敏感性结合起来，使得这一分析方法更精确、更简便。

该试剂盒用于检测人外周血样品，推荐用于流式（FCM）和免疫荧光（IF）。

产品组分

注：抗体储存液为PBS，pH7.4，含0.09%叠氮钠和0.2%（w/v）BSA。20μL/次。

运输和保存方法

运输方式：冰袋运输

保存方式：4℃避光保存，严禁冻存，避免直接暴露于光线下。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）孵育时间、温度及离心时间应参考操作说明，否则可能影响实验结果。

3）服用免疫抑制剂的患者其结果可能会异常。

4）溶血标本不能用本试剂盒检测。

5）抗体试剂中均含有防腐剂叠氮钠，是一种有毒物质，操作时避免与皮肤、粘膜接触。

6）本试剂盒只对人的标本做过检测，未对其它的物种进行检测。

7）不能将不同的组分混在同一管样品中进行测定。

产品应用

试剂40404-A：Mouse IgG2a-FITC & Mouse IgG1-PE，同型对照；用于设定阴性范围，消除非特异性荧光的干扰。

试剂40404-B：hCD45-FITC & hCD14-PE，用于淋巴细胞圈门。hCD45-FITC，识别所有白细胞；hCD14-PE，识别人单核细胞及少量粒细胞。

试剂40404-C：hCD3-FITC & hCD19-PE，用于确定T淋巴细胞和B淋巴细胞的百分率。hCD3-FITC，识别所有成熟T淋巴细胞；hCD19-PE，识别所有B淋巴细胞。

试剂40404-D：hCD3-FITC & hCD4-PE，用于确定辅助性T淋巴细胞（CD3+CD4+）占总淋巴细胞的百分率；hCD14-PE，识别辅助性T细胞（Th/i）及单核细胞。

试剂40404-E：hCD3-FITC & hCD8-PE，用于确定抑制性T淋巴细胞（CD3+CD8+）占总淋巴细胞的百分率；hCD8-PE，识别抑制性T细胞（Ts/c）及NK细胞。

试剂40404-F：hCD3-FITC & hCD16-PE & hCD56-PE，用于确定T淋巴细胞和NK细胞的百分率；hCD16与hCD56抗体识别NK细胞。

试剂40404-G：10×RBC Lysing Buffer，裂解红细胞，利于分析外周血白细胞。

使用方法

1 标本的采集与制备

EDTA抗凝的静脉血（至少1mL），建议标本在采集后6h内进行染色分析。检测的外周血白细胞浓度在3.0×103~10.0×103个/μL。（若高于10.0×103个/μL，则需要稀释血标本；若低于10.0×103个/μL，则需要增加标本量或分离白细胞）

2 红细胞裂解液的稀释

计算所需要的红细胞裂解液工作液体积（每管加2mL 1×工作液），取适量40404-G，用去离子水稀释到1×工作液。红细胞裂解液的溶血效力受温度影响，使用前要预先平衡至室温（20℃~25℃）。

注稀释后避光室温保存，根据每次所需量进行稀释。

3 染色及固定细胞

1）每份病人标本用六根12×75mm流式管，分别标上样品编号（1、2、3……）和管号（A、B、C、D、E、F）

2）取20μL试剂A加入到每份样品的A管中，取20μL试剂B加入到每份样品的B管中，取20μL试剂C加入到C管中，取20μL试剂D加入到D管中，取20μL试剂E加入到E管中，取20μL试剂F加入到F管中。

3）向每份标本的试管中加入100μL抗凝全血，充分混匀，室温（20℃~25℃）避光反应20~30min。

4）每管加入2mL（1×）红细胞裂解液（20℃~25℃），充分混匀，室温避光反应10~12min，至液体透明。

5）1000rpm离心5min，弃上清。

6）加入2mL PBS洗涤液，1000rpm离心5min，弃上清。【PBS洗涤液配方：PBS+1% FBS】

7）细胞染色后立即上流式细胞仪分析；或用0.5mL 2%甲醛溶液固定细胞，4℃过夜。

4 流式检测

用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488nm；发射波长Em=578nm，PE的橙红色荧光建议使用FL2通道检测；FITC最大激发波长为Ex=488 nm，最大发射波长Em=525 nm，FITC的绿色荧光在FL1通道检测。使用试剂40404-A作为阴性对照，试剂40404-B用于淋巴细胞圈门。