Hoechst 33258

产品信息

产品描述

Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10 μg/mL。     

产品性质

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

配制母液

Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10 mg/mL。因此可用无菌超纯水配制成1-5 mg/mL的储存液于4℃避光保存。使用时用PBS或者其他合适缓冲液将其稀释成0.5-10 μg/mL工作液。

注：Hoechst 33258溶于PBS或者其他缓冲液时会有沉淀产生，因此不能用上述缓冲液进行储存液的配制。

注意事项

1）Hoechst 33258 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 用PBS或合适的缓冲液制备0.5-10 μg/mL Hoechst 33258染色液。

2. 固定的细胞或组织染色：
a）对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。 
b）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c）吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：
a）细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b）在 37℃培养细胞 10～20 分钟。

c）用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。