产品信息

产品描述

cfDNA提取过程中，常会引入大片段DNA或gDNA的污染。常规情况下，这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是，由于cfDNA仅有170 bp左右，常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低，无法获得理想的cfDNA回收效果。

Hieff NGS® cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是针对上述问题的解决而专门设计的磁珠类产品，其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制备，配合精心优化的缓冲体系和已经验证的操作体系，可精确回收100-200 bp cfDNA，有效去除大片段DNA和gDNA的污染，同时具有操作简单、回收率高（>95%）等优势。使用本品获得的cfDNA产物，可直接应用二代测序文库构建、克隆、酶切、连接等反应。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

运输与保存方法

冰袋运输。

2-8℃保存，有效期六个月。避免冷冻！

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3）80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。

4）进行长度分选时，初始样品体积需≥50 μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性。

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选（双轮法）

长度分选操作流程如图1所示，具体操作如下。                                                                 

图1 双轮分选操作流程。

表1磁珠cfDNA片段回收推荐比例

注：“×”表示样品DNA体积。若样品DNA体积为100 mL，则第一轮磁珠使用体积为0.47×100 mL=47 mL；第二轮磁珠使用体积为0.33×100 mL=33 mL。

1）请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2）根据要求，参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠，涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3）室温孵育5 min。

4）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心转移上清到干净的离心管中。【注意：转移上清时，请勿吸取磁珠，即使微量残留都将影响后续文库质量。】

5）参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。

6）涡旋混匀或移液器吹打10次混匀，室温静置5 min。

7）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

8）保持EP管始终处于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，小心移除上清。

9）重复步骤8。

10）保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂（约5 min）。【注意：切记磁珠不要干燥时间太久，磁珠干燥过度将影响纯化效果。】

11）将离心管从磁力架中取出，加入适量ddH2O（≥20 μL），涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀，室温静置5 min。

12）将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心吸取上清至干净的管中，即完成分选。

3. 文库大小分选参考条件

使用Hieff NGS® cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的双轮分选比例，回收100-200 bp DNA片段。结果显示：Hieff NGS® cfDNA Clean Beads的回收率高达95%以上（表2），且几乎完全去除了大片段污染（图2）。

图2. 模拟cfDNA纯化结果。

阴性对照为20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物（红色），使用cfDNA Clean Beads对混合物进行0.47×/0.33×分选（绿色和蓝色，平行重复）。

表2. 双轮回收后100-200 bp各片段的回收率统计。