T4 Polynucleotide Kinase T4 多聚核苷酸激酶

产品信息

产品描述

T4 Polynucleotide kinase是一种多聚核苷酸5’-羟基激酶，能够催化ATP的γ-磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或者RNA）的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷上，并且该反应是可逆的。具有3’-端磷酸酶活性，将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’-磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解。当ADP存在时，T4 PNK具有5’-端磷酸酶活性，催化5’-P-寡聚/多聚核苷酸和ATP末端5’-磷酸基团交换。适用于DNA文库的构建以及末端标记制作探针。

产品组分

【注】：10×T4 PNK Buffer中不含ATP，客户需自行添加，参考终浓度1 mM，或使用T4 DNA ligase buffer。

运输和储存方法

干冰运输。

-20℃保存。有效期一年。

产品应用

DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应；

DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序；

将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´ 磷酸化，制备pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3´ 端；

对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记。

单位定义

37℃，30 min内催化1 nmol [γ-32P] ATP发生重组反应所需要的酶量.

质量控制

核酸外切酶残留检测：10 U本酶和0.6μg λ-Hind III在37℃下孵育16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育4小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌DNA残留检测：10 U本品中残留的核酸经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。