Hieff NGS® DNA Selection Beads 分选磁珠(完美替代AMPure XP Beads)

产品信息

产品描述

   Hieff NGS^® DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理，配合精心优化过的缓冲体系，可用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选、纯化。本产品可适用于各品牌的DNA、RNA建库试剂盒，和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同，片段回收效率和文库大小分布均与AMPure XP Beads高度吻合。

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存，效期一年。避免冷冻！

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3）80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。

4）进行长度分选时，初始样品体积需≥100 μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性。

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选（双轮法）

长度分选操作流程如图1所示，具体操作如下。                                                                 

图1双轮分选操作流程

1）请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2）根据要求，参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠，涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3）室温孵育5 min。

4）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心转移上清到干净的离心管中。

注意：转移上清时，请残留2 μL液体于管底，切勿全部吸出上清，避免吸到磁珠并影响分选效果。

举例：当初始体积为100 μL，第一轮使用0.8×比例，即加入80 μL磁珠，推荐吸出178 μL的上清。

5）参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。

6）涡旋混匀或移液器吹打10次混匀，室温静置5 min。

7）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

8）保持离心管始终处于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，小心移除上清。

9）重复步骤8。

10）保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂（约5 min）。

注意：切记磁珠不要干燥时间太久，磁珠干燥过度将影响纯化效果。

11）将离心管从磁力架中取出，加入适量ddH2O（≥20 μL），涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀，室温孵育5 min。

12）将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心吸取上清至干净的管中，即完成分选。

3. DNA片段分选参考条件

通过超声法将小牛胸腺DNA进行片段化，制备100-1000 bp的Smear片段，根据表1进行双轮分选。结果使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析（图2）。

表1磁珠文库分选推荐比例

注：表中“×”表示样品DNA体积。如DNA片段大小为300 bp，样品DNA体积为100 mL，则第一轮分选磁珠使用体积为0.80×100 mL=80 mL；第二轮分选磁珠使用体积为0.20×100 mL=20 mL。 

图2 Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram

Smear fragments溶于ddH2O，使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选