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Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit mRNA纯化试剂盒
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit mRNA纯化试剂盒 |
YB022G |
24 T |
616.00 |
YB022G |
96 T |
2266.00 |
产品描述
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是钰博生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,通过与带有poly(A)尾巴的mRNA相结合,将mRNA从0.1-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。
产品组分
组分名称 |
YB022G |
YB022G |
mRNA Capture Beads |
1.2 mL |
4.8 mL |
Beads Binding Buffer |
1.2 mL |
4.8 mL |
Beads Wash Buffer |
15 mL |
60 mL |
Tris Buffer |
1.2 mL |
4.8 mL |
Nuclease-free water |
1 mL |
4 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
2-8℃保存,有效期一年。避免冷冻!
使用方法
一、 自备材料
磁力架,Nuclease-free离心管。
二、操作流程
图1 mRNA纯化试剂盒操作流程
二、 操作步骤
3.1 实验前准备
将mRNA Capture Beads从4℃取出,静置使其温度平衡至室温(约30 min)。
3.2 样本准备
① 在一个Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water将0.1-4 μg总RNA稀释至50 μL。
② 将稀释的RNA置于PCR仪中,65℃,5 min;4℃,hold,使RNA变性,冰上放置备用。
3.3 mRNA与磁珠的结合
① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 的变性RNA样品中,用移液器反复吹打6次,使其充分混匀。
② 室温孵育5 min,使mRNA与磁珠完全结合。
③ 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,吸除全部上清。
3.4 样本的洗涤
① 将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,吸除全部上清。
③ 重复上一步骤,共洗涤两次。
3.5 mRNA样本第一轮洗脱
① 将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品放置于PCR仪中,80℃,2 min;25℃,hold,将mRNA洗脱下来。
3.6 mRNA与磁珠的再次结合
① 加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 室温孵育5 min,使mRNA结合到磁珠上。
③ 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。
3.7 样本的洗涤
将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer,用移液器反复吹打6次彻底混匀,将样品重新放回至磁力架中,室温静置5 min,然后吸除全部上清。
【注】:最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。
3.8 mRNA样本终洗脱
方案一:用于逆转录反应。
将样品从磁力架上取出,加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠,用移液器吹打6次以彻底混匀。将样品置于PCR仪中80℃,2 min后,立即置于磁力架上,室温静置5 min。待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。
方案二:用于RNA文库的构建。
可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer,进行文库构建。
【注】:样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用(建议立即进行后续反应),也可以置于-80℃保存。
注意事项
1)磁珠使用前务必要回温至室温,并充分混匀,否则可能影响样品的回收效率。
2)操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。
3)本产品和其他试剂配套使用时,请按照具体实验说明来进行操作。
4)想要获得好的纯化效果,需要有完整度良好的总RNA,确保RIN值在7.0及以上。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
部门 |
姓名 | 手机 | |||
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