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Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1（48种）

Product Introduction

Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1（48种）

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1（48种）	YB024G	48×2 T	1493.00
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 2（48种）	YB024G	48×2 T	1493.00

产品描述

Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1（48种）是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer，适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号	名称	规格
12611ES02	PE Adapter	336 μL
	Universal Primer	240 μL
	Index Primer 1-48	5 μL each
12612ES02	PE Adapter	336 μL
	Universal Primer	240 μL
	Index Primer 49-96	5 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存，有效期1年。

注意事项

1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer，每种Index Primer可以构建2个DNA文库，每个Set可以构建96个DNA文库。

4. 切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。

5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。

接头连接（Adapter Ligation）：

在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头，即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；

表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	推荐Adapter(15 μM)使用量
400 ng	30:1	3.5 μL
300 ng	40:1	3.5 μL
200 ng	60:1	3.5 μL
100 ng	100:1	3.0 μL
50 ng	100:1	1.5 μL

【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

3. 配制表2所示反应体系；

表2. Adapter Ligation反应体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
Ligation Enhancer	30*
Quick T4 DNA Ligase	5
PE Adapter	x**
ddH2O	5-x

【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：

表3. Adapter Ligation反应程序

温度	时间
热盖	Off
20°C	15 min
4°C	Hold

【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。

文库扩增（Library Amplification）

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；

表4. PCR扩增反应体系

名称	体积（μL）
2× Super Canace®ⅡHigh-Fidelity Mix	25
Universal Primer	2.5
Index Primer	2.5
Adapter Ligated DNA	20

【注】：文库扩增引物来自钰博生物接头引物试剂盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增。

表5. PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	根据实验需要调整
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	-

序列信息

PE Adapter for Illumina：

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTC -3´
5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3´

Universal Primer for Illumina：
5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

Index Primer for Illumina：

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

xxxxxxxx表示8 bp 的Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：

Index Primer名称	引物中Index序列	测序对应Index序列	Index Primer名称	引物中Index序列	测序对应Index序列
Index Primer 1	ATCACGTT	AACGTGAT	Index Primer 25	TGCGATCT	AGATCGCA
Index Primer 2	CGATGTTT	AAACATCG	Index Primer 26	TTCCTGCT	AGCAGGAA
Index Primer 3	TTAGGCAT	ATGCCTAA	Index Primer 27	TAGTGACT	AGTCACTA
Index Primer 4	TGACCACT	AGTGGTCA	Index Primer 28	TACAGGAT	ATCCTGTA
Index Primer 5	ACAGTGGT	ACCACTGT	Index Primer 29	TCCTCAAT	ATTGAGGA
Index Primer 6	GCCAATGT	ACATTGGC	Index Primer 30	TGTGGTTG	CAACCACA
Index Primer 7	CAGATCTG	CAGATCTG	Index Primer 31	TACTAGTC	GACTAGTA
Index Primer 8	ACTTGATG	CATCAAGT	Index Primer 32	TTCCATTG	CAATGGAA
Index Primer 9	GATCAGCG	CGCTGATC	Index Primer 33	TCGAAGTG	CACTTCGA
Index Primer 10	TAGCTTGT	ACAAGCTA	Index Primer 34	TAACGCTG	CAGCGTTA
Index Primer 11	GGCTACAG	CTGTAGCC	Index Primer 35	TTGGTATG	CATACCAA
Index Primer 12	CTTGTACT	AGTACAAG	Index Primer 36	TGAACTGG	CCAGTTCA
Index Primer 13	TGGTTGTT	AACAACCA	Index Primer 37	TACTTCGG	CCGAAGTA
Index Primer 14	TCTCGGTT	AACCGAGA	Index Primer 38	TCTCACGG	CCGTGAGA

Index Primer名称	引物中 Index序列	测序对应Index序列	Index Primer名称	引物中Index序列	测序对应Index序列
Index Primer 15	TAAGCGTT	AACGCTTA	Index Primer 39	TCAGGAGG	CCTCCTGA
Index Primer 16	TCCGTCTT	AAGACGGA	Index Primer 40	TAAGTTCG	CGAACTTA
Index Primer 17	TGTACCTT	AAGGTACA	Index Primer 41	TCCAGTCG	CGACTGGA
Index Primer 18	TTCTGTGT	ACACAGAA	Index Primer 42	TGTATGCG	CGCATACA
Index Primer 19	TCTGCTGT	ACAGCAGA	Index Primer 43	TCATTGAG	CTCAATGA
Index Primer 20	TTGGAGGT	ACCTCCAA	Index Primer 44	TGGCTCAG	CTGAGCCA
Index Primer 21	TCGAGCGT	ACGCTCGA	Index Primer 45	TATGCCAG	CTGGCATA
Index Primer 22	TGATACGT	ACGTATCA	Index Primer 46	TCAGATTC	GAATCTGA
Index Primer 23	TGCATAGT	ACTATGCA	Index Primer 47	TAGTCTTG	CAAGACTA
Index Primer 24	TTGACTCT	AGAGTCAA	Index Primer 48	TTCAGCTC	GAGCTGAA

Index Primer名称	引物中 Index序列	测序对应Index序列	Index Primer名称	引物中Index序列	测序对应Index序列
Index Primer 49	TGTCTATC	GATAGACA	Index Primer 73	GCAACATT	AATGTTGC
Index Primer 50	TATGTGGC	GCCACATA	Index Primer 74	GGTCGTGT	ACACGACC
Index Primer 51	TTACTCGC	GCGAGTAA	Index Primer 75	GAATCTGT	ACAGATTC
Index Primer 52	TCGTTAGC	GCTAACGA	Index Primer 76	GTACATCT	AGATGTAC
Index Primer 53	TACCGAGC	GCTCGGTA	Index Primer 77	GAGGTGCT	AGCACCTC
Index Primer 54	TGTTCTCC	GGAGAACA	Index Primer 78	GCATGGCT	AGCCATGC
Index Primer 55	TTCGCACC	GGTGCGAA	Index Primer 79	GTTAGCCT	AGGCTAAC
Index Primer 56	TTGCGTAC	GTACGCAA	Index Primer 80	GTCGCTAT	ATAGCGAC
Index Primer 57	TCTACGAC	GTCGTAGA	Index Primer 81	GGAATGAT	ATCATTCC
Index Primer 58	TGACAGAC	GTCTGTCA	Index Primer 82	GAGCCAAT	ATTGGCTC
Index Primer 59	TAGAACAC	GTGTTCTA	Index Primer 83	GCTCCTTG	CAAGGAGC
Index Primer 60	TCATCCTA	TAGGATGA	Index Primer 84	GTAAGGTG	CACCTTAC
Index Primer 61	TGCTGATA	TATCAGCA	Index Primer 85	GAGGATGG	CCATCCTC
Index Primer 62	TAGACGGA	TCCGTCTA	Index Primer 86	GTTGTCGG	CCGACAAC
Index Primer 63	TGTGAAGA	TCTTCACA	Index Primer 87	GGATTAGG	CCTAATCC
Index Primer 64	TCTCTTCA	TGAAGAGA	Index Primer 88	GATAGAGG	CCTCTATC
Index Primer 65	TTGTTCCA	TGGAACAA	Index Primer 89	GTGTGTCG	CGACACAC
Index Primer 66	TGAAGCCA	TGGCTTCA	Index Primer 90	GCAATCCG	CGGATTGC
Index Primer 67	TACCACCA	TGGTGGTA	Index Primer 91	GACCTTAG	CTAAGGTC
Index Primer 68	TGCGTGAA	TTCACGCA	Index Primer 92	GCCTGTTC	GAACAGGC
Index Primer 69	GGTGAGTT	AACTCACC	Index Primer 93	GCACTGTC	GACAGTGC
Index Primer 70	GATCTCTT	AAGAGATC	Index Primer 94	GCTAACTC	GAGTTAGC
Index Primer 71	GTGTCCTT	AAGGACAC	Index Primer 95	GATTCATC	GATGAATC
Index Primer 72	GACGGATT	AATCCGTC	Index Primer 96	GTCTTGGC	GCCAAGAC