Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

产品信息

产品描述

Hifair^® Ⅲ One Step qRT-PCR Probe Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板，使用基因特异性引物，利用耐热Hifair^® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并搭配使用探针和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase，配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。

本试剂盒以预混的Mix形式提供，2×Hifair^®  Ⅲ P buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等，优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适用于荧光标记探针的高特异性检测系统。此外，Hifair^®  UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair^® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase等。

产品组分

【注】P buffer为Probe buffer的简写，UH为UNICON-Hifair的简写。

适用机型

High Rox适用机型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

Low Rox 适用机型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

不需要Rox校正的仪器型号：

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon^®, Opticon^® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler^® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene^® Q, Rotor-Gene^® 3000, Rotor-Gene^® 6000

Roche Applied Science LightCycler^® 480, LightCycler^® 2.0; Lightcycler^® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler^®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以20 μL为例）

【注】:a) 所有试剂使用前应充分混匀。

b) 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

c) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

d) 探针浓度：探针终浓度可在50 nM-250 nM之间调整。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

f)模板稀释：一步法qRT-PCR灵敏度极高，推荐将模板稀释后(如稀释至2-5 μL/样本)加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性。

g) 反应体系：建议以大体系进行实验，如20 μL或50 μL。

标准扩增程序

【注】 a) 对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提升扩增效率和灵敏度。

b) 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整，时间为5min时可满足大多数基因的鉴定。

c) 不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。