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Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1U/μl) 虾碱性磷酸酶
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1U/μl) 虾碱性磷酸酶
Product Introduction

Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1U/μl) 虾碱性磷酸酶

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Shrimp Alkaline   Phosphatase (SAP) (1 U/μl) 虾碱性磷酸酶

YB081P

250 U

656.00


产品描述

Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团,因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板。

本品为虾来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。该酶作用于末端去磷酸化,无论末端为粘端,还是平端。SAP 也可以用来降解PCR 反应中的dNTPs,用于后续测序和SNP分析。


产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

YB081P(250 U)

10322-A

Shrimp Alkaline Phosphatase (rSAP) (1 U/μl)

250 U

10322-B

10×rSAP buffer

1.25 ml


产品性质

来源(Source)

携带北极虾(Pandalus borealis)碱性磷酸酶基因表达质粒的毕赤酵母

分子量(Molecular Weight)

单体分子量54 kDa;rSAP为同源二聚体。

质量控制(Quality Control)

无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染

比活(Specific Activity)

~3000 U/mg

纯度(Purity)SDS-PAGE

>95%

热灭活(Thermal Inactivation)

65℃温浴5 min,活性完全不可逆丧失

储存液条件(Storage   conditions)

25 mM Tris-HCl   (pH7.5), 1 mM MgCl2, 50% Glycerol

活性定义(Unit definition)

在37℃条件下,1ml反应体系中1min内能水解对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosph- ate)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。


运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存。


注意事项

1)本品同其他碱性磷酸酶类似,具有Zn2+Mg2+依赖性,本品配方中酶活性中心有紧密结合的锌原子,反应中无需再次补充。

2)金属离子螯合剂(如EDTA)、无机磷酸盐等会抑制该酶活性。单价盐离子会使活性增强。

3DTTβ-ME等还原剂存在时,该酶活性会降低。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

DNA去磷酸化

① 在EP管中加入下列试剂*:

组分

体积

DNA 片段**

1 pmol

10×rSAP buffer

2 µl

Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/μl)

1 µl

无菌ddH2O

Up to 20 µl

【*】可根据比例相应放大反应体系。

【**】1 pmol DNA片段量约相当于1ug 3kb大小的质粒。

② 混匀上述试剂,于37℃孵育30 min。

③ 将EP管65℃,5 min温浴,终止反应。


 部门

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